干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站
标题:
贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题
[打印本页]
作者:
jifengtang
时间:
2015-11-3 21:42
标题:
贴块法培养MSC，脐带的处理若干问题
最近一直在培养脐带间充质干细胞，对于脐带处理流程有些问题需要求教一下：
, i& U' j$ t! M- Y# P4 }6 ?, g
一、首先我想问一下脐带的结构，看到网上有一些说法，脐带最外层是羊膜组织，再里面是华通氏胶，再往里是比较松软的结缔组织，里面包裹2根动脉一根静脉。
! r* y( f% g" i" G8 I# C
二、我处理的流程：是把脐带冲洗后剪成小段，除去血管里残留的血，将脐带从中间剖开，去除静脉动脉和结缔组织，用手术刀切成2mm3的小块，然后贴块，培养瓶先用血清润洗。
) G$ c, E: G1 ?$ @+ M, n1 F
# K% [# c& {' h( D5 ^( q- p& c( p
问题1：
. s( _! K8 ^8 S* d( }5 @7 I
网上看到的脐带结构的说法是否准确？
% J/ o$ I1 }+ {+ G5 H
问题2：
: ?8 e ?5 ]; F
处理时不剥离羊膜，原代细胞爬出影响有多大？
k* L2 Q( W: m5 ~ I% t5 C4 [2 Q: W
问题3：
# g3 ~4 t9 I5 d0 R; i3 t+ S
里面的结缔组织是否需要去除，如果去除不干净会有什么影响？
* j. z: [2 j. n8 E! I( l
问题4：
( V( \3 b) O9 r3 F4 k
一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块有什么不一样？
}2 C: L# W4 O9 d! N
作者:
wuhuaguo88l
时间:
2015-11-4 11:46
问题1：网上图片还是比较准确的
8 r3 O+ Q& d% P, _9 h
问题2：一般是要去除羊膜的
3 I3 _8 f9 w6 U; r1 F- d" H/ A, W/ h
问题3：去除三根血管和羊膜后，剩下的都可以用来做原代
, y8 U% A* R1 @' D
问题4：剪刀剪碎比较方便，手术刀貌似不好用。
作者:
haibara007007
时间:
2015-11-4 15:33
1：结构非常准确，就是这个样子
8 h/ w0 v; u6 g7 n+ Z! {
2:去除比较好，不然细胞会有一些显上皮状
# ^( Z& T( T0 u
3：可以不去除
9 ^: l, e; Q" F2 b ]7 L; _
4：一般都是用剪刀，区别的话，这个还真没做过
作者:
chuanbaozang
时间:
2015-11-5 10:34
同意楼上几位的回答
作者:
fuyinsheng
时间:
2015-11-5 10:38
1、结构没有问题
, ]1 c! h/ ?) w! V4 q9 q! Z5 F5 G: n0 I
2、一般需要将华通式胶单独分离下来，以确保细胞纯度，因为羊膜上皮细胞生长条件与间充质相似，已造成混杂
, @; C( q; j% y
3、去除血管的同时尽量将残留的血管壁等杂志从华通式胶上分离下来
; C5 U& ^& k" m {
4、刀切的组织块相对较大，降低了细胞爬出的效率，剪刀更细碎一些
作者:
月_幻影
时间:
2015-11-5 14:19
1.结构正确；
2 }% R, b O1 t5 y9 n7 P; S
2.做原代一般建议剥离羊膜；
! B% @5 H) o. M: k! u
3.我们做的时候一般是将脐带剖开，去除三根血管然后直接用镊子从羊膜上往下撕华通式胶；
/ D( w6 d) Y0 r. d8 [! I$ {2 b
4.通常使用剪刀剪碎后铺瓶培养，用刀切似乎不太方便也没有剪刀剪得碎。
作者:
jifengtang
时间:
2015-11-5 17:11
回复
haibara007007
的帖子
; j: L4 l7 R9 x# B
, v" b6 f P0 {* f
我刚做时间不长，羊膜和华通氏胶有些分不太清楚，请问羊膜厚度大概有多少？
作者:
fuyinsheng
时间:
2015-11-12 16:38
回复
jifengtang
的帖子
8 t3 }9 J ]( s3 J' c
. L# M2 y9 q& o
羊膜非常薄，百十微米左右，最外面一小层
作者:
小豆芽
时间:
2015-11-27 14:20
1、结构式正确的；
) y' Y) p7 n3 E
2、在组织块贴壁培养时，一般是需要剥离羊膜的，这样可以保证细胞的纯度，同时也有利于细胞爬出；
; b: L: J2 w( \$ n4 m' v+ Z; ]
3、最好是能够去除，当然不去除也不会有太大影响，可以进行原代培养；
A+ j; O, C6 ~+ _' L0 A4 d
4、用刀切的话，操作不如剪刀方便，而且刀切组织块比较大，没有剪刀剪得碎。
作者:
redmaple
时间:
2015-11-27 14:29
为保证细胞的纯度，还是要剥离；
5 H7 F& P) b" M. m6 t4 V. k, O2 @6 m
不剥离，杂质太多，影响细胞的生长
作者:
woshibotao_01
时间:
2015-11-27 16:18
1，说法我觉得靠谱，结缔组织我看到过的。不是很明显。
+ Z% V3 h! j0 b, I! z7 Z) l' R
2.把膜剥离是好的，羊膜贴上不但阻碍华通胶跟底面接触，而且还会爬出上皮细胞样状杂细胞。不剥离的话，影响肯定是有的，但不是很大，因为杂细胞在传代后会淘汰掉的。
& i7 w0 w# C$ t' ]4 _, A, h
3，没有去除，感觉影响不大。
6 b* x5 }4 x8 c7 l
4.手术刀不好用，剪刀更方便。
作者:
tlms1991
时间:
2015-11-30 01:43
回复
小豆芽
的帖子
) a2 Y1 p, _' H8 `% Z/ r. e
8 Y* D+ C; \$ X
怎样可以让组织块贴的很牢？我的总是飘起来，求赐教！
作者:
小豆芽
时间:
2015-11-30 13:49
回复
tlms1991
的帖子
$ Z$ P: D0 L' }' c! Y, S* H& @" I7 l
$ J5 I2 F/ `9 a( w" T9 _
脐带处理时去掉羊膜、动脉、静脉，将华通胶剪碎大约3mm3，将剪碎的华通胶均匀铺开，倒置放置4-6小时添加培养液。在培养过程中注意尽量不要晃动。
作者:
正义的花生
时间:
2015-12-2 00:06
回复
小豆芽
的帖子
9 E4 F) n6 S0 I& s
/ U) g7 s8 R6 ?- p! ?( L8 Q
我现在做的是剪成2CM左右小段后 剪刀穿过静脉从中剪开 然后刮掉静脉壁 剥出两根动脉 再私下胶质
$ n& D! ~" M! v* e3 {/ y
请问下静脉壁不刮干净的话影响大吗
作者:
小豆芽
时间:
2015-12-2 13:12
回复
正义的花生
的帖子
! j( D$ x! E! ^+ P5 s
& s% K3 r0 W1 |9 p$ x$ }7 _
影响不是太大，在培养的过程中，细胞也是会慢慢纯化的
作者:
tlms1991
时间:
2015-12-4 13:11
回复
小豆芽
的帖子
7 i. X! I) @4 B0 P8 e; W& h; h4 v5 g# v
' F4 ~2 \ q0 _
谢谢哈！我试试。
作者:
2013sp
时间:
2015-12-8 11:07
1：准确！
& k: ?0 b4 M' d# ?7 @& w
+ _9 X2 Q, k0 K6 }4 ~% U {5 p/ ?
2：我认为影响不大。
6 Y# `. [9 z$ U9 G9 D
( \( N6 R' d& y+ K, d* g* C& ]
3：我建议把结缔组织去除，因为脐带外表面与皿底接触很难爬出细胞。
1 V# b2 c* b& ]8 S1 u3 s1 R
# `( s, T8 M- L# N/ n, }
4：手术刀切的比剪刀剪的大的多，也有文献说手术刀如果切的大小合适，效果很好！
) A! s1 w+ O( a
作者:
optimus
时间:
2016-1-21 09:47
我们没有去除羊膜，只是剥离了血管。做出来效果也还是很好的。
作者:
zhangjieyctc
时间:
2016-1-21 15:19
回复
wuhuaguo88l
的帖子
, K5 P: `+ N9 ^, }+ x% s
' Q: ?; c) L, K& C. n0 M
结构既然没错的话，那结缔组织在里面没有影响嘛？
作者:
firstaider
时间:
2016-2-3 14:46
回复
jifengtang
的帖子
" J$ |; O/ M+ }( P, C* ~
! U3 C x4 l* D3 C7 G
问题1：
# Y6 t V8 E u1 ?
脐带结构的说法准确
9 H# d& |' I2 H4 A" f. P
问题2：
3 u1 b' }. _! v5 a
处理时不剥离羊膜，上皮细胞会影响原代细胞爬出
& W$ g+ f/ q$ t2 \
问题3：
% Z7 |& h' H0 A7 S, a
里面的结缔组织不需要去除，否则华通氏胶得率太低
: y2 i s# q6 s5 t9 W
问题4：
, T6 A+ ~; _9 m! D3 i( H& L. K
一般最后都是用剪刀剪碎华通氏胶，用手术刀切成小块降低了细胞爬出的效率
作者:
jifengtang
时间:
2016-2-12 21:44
回复
firstaider
的帖子
6 B" \7 y$ Y' |- U
& {2 G2 N3 W% R5 {+ F
非常感谢！！！
作者:
happy_noel
时间:
2016-2-15 16:51
1.解剖结构准确，是这个样子。
) [3 s9 q* K$ H' D
2.不剥离羊膜，对爬出细胞影响不大，杂细胞都可以通过换液去除掉。
* }/ i f5 S% f" t6 ^9 p0 }
3.里面的结缔组织不用去除干净，没有太大影响。
5 Q1 _- c/ E! N) P
4.用剪刀比用手术刀好操作。
作者:
suruyu
时间:
2016-2-19 14:17
1、结构式正确的；
! A. q. D& d5 Q; ]. Y1 r7 r/ v
2、我们不剥离，细胞状态一直很好，纯度也高；
: V- h: x: r5 I
3、我们通常都是直接剥离完3根血管，剩下组织全部贴壁培养了，木有问题；
0 ^3 K5 @. n; D- G* p7 A
4、用眼科剪很容易操作。
作者:
jifengtang
时间:
2016-2-24 12:56
回复
suruyu
的帖子
1 y* G \8 {9 @
, B% R! `* ^+ ?1 O; E
非常感谢！！！
作者:
tingting2113
时间:
2016-3-1 10:22
回复
jifengtang
的帖子
8 B+ S; e. w5 M- C7 U+ l
) d' K( {& I+ H
1、结构准确
& i% e p; x4 s7 |" t& T
2、不剥离羊膜爬出的细胞比较杂，影响后续使用。
) q: K8 C& a, w0 h" P2 }3 g- V
3、我们没有去处结缔组织这一步。
3 Q! D) e6 u( b3 |
（1）纵向剖开脐带小段（我们一般直接用组织镊撕开）。
' p5 S. u ]3 b5 y0 X2 \" D- B, [
（2）去除三根血管，其间静脉壁比较薄，去除是时候要注意，如果去除不干净，培养的细胞中可能会混有静脉内皮细胞。
" L5 y9 g# H( o- j' j- d
（3）此时静脉已展开呈现片状，直接用组织镊撕取华通氏胶，避开最下层的羊膜，也就是脐带的最外层。
2 w& G& x$ P3 ]- ^0 t/ U
（4）剪碎，培养。
2 h, T" w9 _- i! q
4、手术刀切的快块比较大，另外操作过程暴露面大。剪的话，直接把华通氏胶放在离心管里，剪起来很方便。
作者:
晗晗
时间:
2016-4-18 11:07
1.网上说的没有问题
/ A6 ]9 a( ]0 E5 B4 I+ m
2.3.组织贴壁法这些可以都不用去除，要是酶消化法就需要剔除外面的羊膜
3 `/ Z7 d6 S# _2 ]8 m
4.还是用手术剪把，因为那个东西有点滑，比较艮，用手术剪比较方便
作者:
saliai2016
时间:
2016-4-19 10:03
最好将羊膜去掉，可以保证细胞的纯度；
+ f- O+ {+ Z8 N: I, l! d) x# t3 F
至于手术刀和剪刀的问题，个人觉得，剪刀可能更好操作一些，剪得碎了爬出来细胞的概率相对大些。
欢迎光临 干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)
Powered by Discuz! X1.5