间充质干细胞冻存，冻存管需要置于液氮罐内的液面之下吗？

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间充质干细胞冻存，冻存管需要置于液氮罐内的液面之下吗？
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2 d* x( H6 M4 Y. N5 s  k大家给液氮罐补充液氮，一般是在液氮剩余几成的时候补充？剩余三分之一时？4 |4 m/ m0 M' N7 n0 r$ V

$ V* V+ @. ]( J# P冻存管置于液面之下和置于液面之上，  冻存的效果差别大不大？                 处于液面之下，液氮会不会渗入冻存管内?+ ~  `& Y$ R& [8 ^0 |+ \
大家一起讨论一下。

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现在用的液氮罐，加液氮是直接倾倒加入的这种款。不是自动灌注的

uslzhang

不一定非要存于液氮下。其实只要-80度的超低温冰箱里存几年也无问题。

hefan1234

细胞保存在液氮液面以下保存效果最好，温度始终是—196℃，但是也有不好的地方，比如冻存管没有密封好的话，液氮容易进去，复苏的时候容易爆裂；不同细胞冻存管都处于液氮中增加了交叉污染的风险。细胞保存在液氮液面以上（接近液面）理论上也是可以的，但是每次加液氮的时候都会出现较大的温度浮动，对细胞保存不利，细胞离液氮液面越远影响越大，所以最好保持液氮液面不要过低，及时补充液氮并尽量缩短液氮罐打开的时间对保存细胞是有好处的。至于—80℃冰箱最好细胞程序降温结束后就转移到液氮箱，细胞放在-80℃冰箱活性下降的速度要比在液氮下快的多，所以为了细胞活性要及时转移到液氮罐，如果是保存容易生长且不要求数量的菌种倒是没什么关系。

海南小石

一般的细胞培养用-80℃的冰箱冻存就行了，有些细胞需要更低的冷冻温度才会用到液氮。
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/ F" w* G5 f: v5 z# Z: ^- @液氮冻存的时候，应该将冻存管全部放到液面以下，这样是保证细胞所处环境温度一致。另外，如果冻存管在液面以上，还会影响到温度下降的速率，对细胞的冷冻不利。

moluxingke

这个还是看情况而定了，如果你的细胞要保存比较久的时间再用的话，建议还是在液氮面一下吧，如果短期内就要复苏，在液面以上也没有太大影响，

gondobar

保存在液面以下最好，我们一般一周加一次或者两次。

swtarron

关键是看你用的那种储存罐了，现在有液相和气相两种；气相储存相比较液相储存有以下优势，液氮不会进入没有密封好的冻存管，复苏时不会爆管，还有一个至关重要的优势，就是可以防止交叉污染；至于说液相的保存温度比气相的更低，其实是没有多大影响的。

tingting2113

回复 536536 的帖子
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1、实验室常用的液氮罐都是液/气相存储，也就是灌满时细胞完全浸在液氮液面以下，随着时间和开罐液氮会挥发，也就是越来越少，细胞逐渐露出液面以上，直至下一次补充液氮，这都是可以的。
  l% f& S! d  |' q- q2、至于什么时候补充液氮，各种液氮罐要求不一，一般都在在液氮罐里有一个台，保证液氮不降到台面下就可以。另外部分液氮罐可以在加监控装置，液氮不足时会报警。* r2 s  f3 K( Y: M( r: k- e
3、冻存管置于液面之下和置于液面之上，冻存的效果差别不大。最近几年比较推崇气相存储，也就是细胞一直置于液面以上，这样不会因为反复补充液氮存在温度变化，也避免了不同细胞同处液面下可能引起的交叉污染。

yooung

我们代数低的也是保存在液氮里面，当然是在液面下面，只是拿出来时，需要慢慢提起来，倾斜倒掉液氮。6 g) J4 e4 S) D0 W! r
我们的是大罐，又不好看液面到哪里了，所以每月加一次。
2 R2 C, f8 m; f' k; h/ |+ R- }5 C冻存管置于液面之下和置于液面之上，  冻存的效果差别就不太清楚了，   不过液面以下温度一定是恒定，之上就不好说了。
3 E" @; J9 v: Q至于处于液面之下，液氮会不会渗入冻存管内的问题，我一般是拧紧管盖，缠三圈封口膜，再放。. t$ C1 x( f9 L' e4 J