无需同源重组的基因敲入

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无需同源重组的基因敲入
4 B( M0 T2 @: l来源：来宝网 / 作者： / 2015-12-30
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8 ^+ R% M8 s) {' T8 [$ U. `亚洲科学家 – 研究员们已为一个不依赖同源重组的DNA修复机制基因嵌入方法开发了改进的工序。- L! L% _$ l- k% n
称为PITCh (精确嵌入目标染色体)，该工序在《自然工序》由特别委任讲师Tetsushi Sakuma, Takashi Yamamoto教授, 特别委任副教授，Ken-Ichi T Suzuki及他们在广岛大学的同事所报道。
9 D7 h: w# |4 B8 @根据该研究团队，PITCh 系统比现有的用基因组编辑工具将外源DNA嵌入目标基因组位点的方法更方便和有效。他们相信新技术将协助快速前进的研究领域，比如筛选新药和创建人类疾病的细胞或动物模式。
! f" p9 j2 r& _2 x( l. ]" X7 J+ ~基因组编辑让研究员能在一目标位点而不是随机位点改造基因组。现有的编辑方法采用改造的核酸酶为分子剪刀，其在基因组的目标位点制造DNA断裂。当DNA断裂点被修复途径修复时，外源DNA嵌入基因组和替代或目标基因组位点的去除被诱导。4 J/ t. _2 w  W- O8 R# T! O
“PITCh 系统是敲入方法的替代方案，其不依赖同源重组，DNA断裂修复途径之一，不像现有的用基因组编辑工具如TALEN或CRISPR-Cas9的敲入技术，后者用同源重组技术，”Sakuma说。6 @: Q- I7 E, N$ Z- i$ ^
Sakuma解释说现有的敲入技术不能用在每一种细胞和生物，因为同源重组的频率多变。因此，研究团队目标另一修复途径,微同源重组介导-尾端连接（MMEJ)，和开发了PITCh系统。
8 ~/ y/ [2 Y& O* A9 P% M研究员们描述了创建载体，转染至细胞，选择敲入细胞，检查嵌入的细致的步骤。一个简化的基因嵌入青蛙胚胎的方法也被描述。
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: `" I' i+ E$ [! T9 ^http://www.asianscientist.com/2015/12/in-the-lab/hiroshima-pitch-mmej-knock/& l' t( ]' P. ?  M  P! `