大鼠BM-MSC取材时候如何避免大鼠皮毛的污染

yiwuya007

最近一直都受污染的困扰5 j& ^3 t. P5 ~6 `) J9 ]1 w
培养基迅速变黄，但是不浑浊，细胞内空泡多，空泡逐渐变大，慢慢细胞漂浮，细胞数量减少。
8 v  {: @' C. q) M- J" I同样的环境培养其他细胞株，没有类似的污染: u  O9 }, T$ A1 A. q- b6 U
怀疑是动物皮毛来的支原体，/ Q( x9 O5 S  P9 X2 q2 u& `
大鼠脱颈后，酒精浸泡5分钟，然后破皮，解剖动物，取下四肢，含双抗的PBS洗无数次，至少5-6次吧。但是，每次细胞都是同样情况。
6 C& S, a* e* g7 q. s) K大家有没有好的方法可以去除皮毛？

limeiying

我们实验室是碘酒反复擦，然后酒精棉脱碘，再剥离皮毛。基本没出现过污染......

baby00000003

这只是异想天开的办法，如果用非常极端的手法处理这个大鼠的表面，可否行得通呢？$ f, z3 O" h9 b$ F6 I+ l8 U: z
只要不影响BM，都是可以的吧？, k$ f" T- p6 }# d( [' T
比如瞬间灼烧，浓硝酸、甲醛浸泡，或者干脆就把皮剥掉然后再用酒精、碘酒什么的浸泡
7 t& D, S: y) I总之就是尽一切可能的手法，把表皮、消化道、呼吸系统给它灭菌了

edwardellen

确定一下酒精的情况吧，是否是75%的医用酒精？
& x. t# L, n. l# j$ G; l0 f5 `8 X双抗浓度是多少？一般都是用正常培养基添加量的十倍。6 ~% _$ ?( ?3 `1 P
你的手术器械灭菌的怎么样？
3 r6 S7 m; i* d. l& ^) \安全柜或是超净台定期检测换滤膜了么？
2 k- ?( w- C+ Q) I8 ]* ~5 `; F/ T另外，一般取骨髓的话，是要先剥皮，简单去除肌肉，截取大鼠后肢。5 I) F; F6 D; c+ e5 m0 `" E4 y
一定要保留关节，保证骨髓腔的完整。$ B$ Z$ m+ y8 l: D/ S9 j3 M+ t  A
在安全柜内操作的时候，是要先去除骨头上残留的肌肉，骨头剃得越干净越好，之后再用十倍双抗洗涤。3 x. }9 h. t# Y: \
双抗洗后用PBS洗，再用钳子去掉关节，之后用PBS冲洗骨髓腔。

edwardellen

确定一下酒精的情况吧，是否是75%的医用酒精？
8 Q( O- u/ W9 {3 S$ h双抗浓度是多少？一般都是用正常培养基添加量的十倍。
  f+ s/ }5 l+ z) g2 C# O6 Q你的手术器械灭菌的怎么样？3 v! j+ H* o) P" n) r/ T3 t
安全柜或是超净台定期检测换滤膜了么？
  l0 q9 t7 }+ ]2 C! ~; {另外，一般取骨髓的话，是要先剥皮，简单去除肌肉，截取大鼠后肢。
" C7 ]/ {$ T9 q& A  s% A+ @一定要保留关节，保证骨髓腔的完整。8 {) m" i( b% h2 h' C  ^  b
在安全柜内操作的时候，是要先去除骨头上残留的肌肉，骨头剃得越干净越好，之后再用十倍双抗洗涤。  P3 o6 I$ D& y
双抗洗后用PBS洗，再用钳子去掉关节，之后用PBS冲洗骨髓腔。

yiwuya007

回复 edwardellen 的帖子; H& ?0 l( P' S- f
1 ~6 s& h4 d9 b9 E% f9 V+ {
十分感谢。
% P9 w" z- c* m) k+ o酒精就是超大桶的，自己配到75
! e! [! B9 F) w双抗洗，我才用普通培养的两倍
" G$ ~3 e1 v1 K1 n  W: J剥离的骨头也是两倍双抗啊
) H. U# d; w7 i$ U* ~; V# \8 ~9 {) E5 E下次试试提高双抗浓度

yiwuya007

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% o2 W3 u! t* ]5 \) R0 ^9 O" Z. ^4 F7 ?8 E3 U5 R! [
谢谢，我也要试试看，这种污染困扰我好久了……

yiwuya007

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; {1 W- w5 l3 L8 ~! H0 y7 n$ Z. P8 i( b7 G
你的意思是在大鼠皮毛上反复碘酒擦？

limeiying

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; e# M- J1 z9 o! K4 N0 l1 @) ^7 u' _  u" d
对。如果觉得是皮毛来源的污染可否考虑先剃毛再消毒和进行后续实验呢？

yiwuya007

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/ [! d$ |: F; d
8 g/ I9 [0 |" o! P5 S- z% P怎么剃毛？全身剃毛还是局部？有什么工具？