跑胶出现三条带？

nichifanlema2

回复 gxbzjznn 的帖子: j4 Z! f, M7 z" p  @

) b0 r$ A6 `7 W# K; P! }中间的是引物二聚体，因为在50左右，你的引物大概是20-30bp吧，最小面的应该是你的引物单链，说明你PCR的时候引物浓度太大，导致引物染色和二聚体特别明显。建议降低PCR时引物浓度。: @- K. R6 i0 a5 q
marker还是挺不错的，是哪个品牌的？

nichifanlema2

回复 gxbzjznn 的帖子) F/ J- O9 z; r8 [8 m  L3 w& _" P
5 |9 ^; P  D1 W; s6 W6 ^1 l
引物二聚体的出现不一定会出现在每次扩增和其它基因的扩增中，其跟引物的设计有关。个人认为，在基因扩增时，引物的都是过量的，如果两对引物直接有4个（含）以上的碱基配对，引物二聚体就常常会出现，在不影响基因扩增和表达趋势的情况下，可以忽略不计。通常使用时的引物浓度为10uM,如果引物二聚体较为明显，或者影响了扩增，可以适当降低引物浓度。另外，为了提高扩增效率和扩增时的特异性，可以提高退火温度。