干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 从肿瘤组织中获取DC特异性抗原 [打印本页]

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 08:45 标题: 从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

大虾们帮忙看看这是什么情况？5 v* w/ h- w$ B* K9 Y" n' C# X
第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图[attach]75490[/attach]% |4 F9 a6 t$ v; b: [" k
平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果[attach]75491[/attach][attach]75492[/attach]。& L; q$ Y% `$ N5 `4 l- F
亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

作者: baby00000003 时间: 2016-2-15 09:01

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

作者: shunho-cell 时间: 2016-2-15 09:13

貌似产物很少？

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 09:20

回复 baby00000003 的帖子$ u3 p _4 c3 a' k

我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 09:33

回复 shunho-cell 的帖子! \/ ~3 F ~% b4 t# n X
, u+ ^# J$ O* a
研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 09:36

回复 baby00000003 的帖子) I7 P) K1 t+ K& j' \
2 s: S' A; a! g w2 k
研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

作者: lgfffancy 时间: 2016-2-15 09:39

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

作者: baby00000003 时间: 2016-2-15 10:20

回复 momoenn 的帖子
0 g7 h  [( X* }  @
总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～" {: s6 L: q4 G  N: H0 n
干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了; b4 V) _& K: ^. ^$ k$ R  V
BCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 11:29

回复 baby00000003 的帖子; }' @+ L& H R% _+ B( |+ ?+ z+ ^
c9 r: F* ]& P5 Q
中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 11:30

回复 lgfffancy 的帖子. V* m( H& f3 y. F2 y" Q3 r, x2 d
" K. B+ \! b$ F
昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 11:33

回复 baby00000003 的帖子4 r: z3 l% M; p$ ~: A& v \9 K* u$ Q

或者，有没有更好的办法让俺学习一下

作者: baby00000003 时间: 2016-2-15 11:45

回复 momoenn 的帖子
4 }/ c( e4 i7 _$ B' [
可以像做western裂细胞那样，加蛋白酶抑制剂。不过这个提取抗原可能最后要求的细胞密度不那么大，也可以忽略那些个水解酶吧～

作者: baby00000003 时间: 2016-2-15 11:46

回复 momoenn 的帖子3 D1 N3 b3 x( b0 W- \
5 E5 U8 j9 X' }3 \, L; k$ T
俺还没做过成块儿的组织提抗原的，也许可以酶消成单细胞？

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 11:56

回复 baby00000003 的帖子( X* G2 D+ G! K3 e2 ^
9 M) c! m" I! b8 o
哦，谢谢

作者: momoenn 时间: 2016-2-15 11:56

回复 baby00000003 的帖子

还要诱导DC，尽量还是别加入外源蛋白吧

作者: lgfffancy 时间: 2016-2-15 21:58

回复 momoenn 的帖子

你的意思是让细胞死去，得到表面抗原？

作者: momoenn 时间: 2016-2-16 08:23

回复 lgfffancy 的帖子! H# S/ J8 @' N; @
; l. i* k+ S2 C( Z
额。死了再把它撕了吧

作者: lgfffancy 时间: 2016-2-16 09:26

回复 momoenn 的帖子

Laughing at me?

作者: momoenn 时间: 2016-2-16 12:34

回复 lgfffancy 的帖子
6 q2 j7 x8 |( {7 D
形象的描述一下啦。等细胞死了，再反复冻融让细胞破裂，不就是把细胞撕了啊？

作者: shunho-cell 时间: 2016-2-17 16:26

应该是这步时细胞已经裂解了

作者: momoenn 时间: 2016-2-18 08:23

回复 shunho-cell 的帖子
" n/ y0 {. |# D" J
昂，我又做了一遍，研磨得更碎了一些。分析了一下，这不不应该离心。显微镜下能看到细胞了

作者: zmfang555 时间: 2016-2-22 15:07

正常情况，研磨后的碎片等杂质一般会很多的，关键是前期留取的肿瘤组织要多，否则最后几乎得不到你想要的东西，尽量剔除正常组织细胞，部分组织不好研磨的一定要用酶消化并灭活。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://www.stemcell8.cn/)