请问这个侧群细胞实验左下角那一团细胞是怎么回事？

haha224

如图，X轴是Hoechst Red ，Y轴是Hoechst Blue，图片上显示的是DAPI，这个侧群细胞实验左下角那一团细胞是怎么回事？右图中文字是DAPI，对应的是Hoechst Blue，大峰前为什么还会有一个小峰？

baby00000003

也许就不是细胞吧，只是非特异性的渣渣
( K/ ?  k5 B/ x8 C因为渣渣体积很小，所以A，H，W也都比较小

lyj-0017

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$ {; e2 v( g) J/ x应该是没有设置阈值吧？所以可能一些小碎片也计算在内了

haha224

+ t2 Q: m0 X- ~- \7 N
! g, l3 R6 E0 J3 v" o
回复 lyj-0017 的帖子+ Q) T. [, ?4 O, s
- ?! A3 g! G7 ?8 H
可是已经圈门了啊，按理说不应该是碎片的
' `9 L7 C; N- B7 P& K/ v4 P
9 W. j! A& g  f# C% e

haha224

回复 baby00000003 的帖子' o, i+ {# s2 J/ b( o8 n: _/ n; R
% G3 ]$ c7 U2 l' h7 ?
可是我已经圈门了，也用PI去死细胞了，图在回复里有，做了2次都是这样，还有没有什么可能吗？

baby00000003

( f2 p2 y8 ?) ^6 a! _/ I

. M8 ]! h# U8 s. ?0 t; }- g/ F重新看了一遍，也许可以这样解释（纯属瞎猜哈）
5 n7 P2 _5 |0 i" t' oH blue可以大约表示DNA含量，这一大一小2个峰表示“G0和非G0的细胞比例”，也就是说这一群细胞大部分处于“细胞分裂的循环”
% f$ u* I6 X. m3 AH red是没有结合DNA的“游离H”，如果计A的话，可否表示‘细胞大小’呢，和FSC意义差不多？这样第一图的解释就是“G0的细胞DNA含量较低，细胞体积也较小，所以在左下角上，而分裂循环的细胞相反，偏右上”
; E+ B$ Q8 J* Y: V& {% E* G/ J( X' u: N
顺便一问，这个H red和PI不会在同一波长上重叠么？你是如何用PI除去早期凋亡，同时又能检测H red的？

haha224

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" p& ?$ D/ i7 l7 a- u, l  t% ]! ~# Q1 U- |7 u6 N
这个我具体不是太清楚，看那些protocols，都是有加PI去死细胞的，可能是H red的激发波长是355 UV，检测是 675nm，而PI激发波长是488 nm，检测的波长在585 nm附近吧

baby00000003

回复 haha224 的帖子8 E1 r  `5 o4 y
* ?/ u* ]- ^3 A) |5 Y5 G& N. t$ M
嗯，查了查，H red是ex350nm，em520nm左右，PI大约ex488nm，em617nm，还是可以分清楚的～