滋养层细胞的复苏

司小可儿

我两天前复苏的滋养层细胞，培养基里面加了1%的双抗，不知道是不是双抗的原因，细胞复苏率特别低，求解答。。。

nichifanlema2

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+ r/ m8 |, V0 V2 x应该不是双抗的原因，有可能是冻存的细胞和复苏过程出现的问题。冻存时一般用含有20%的DMSO，10%-20% FBS的冻存液，用冻存盒进行程序冻存效果比较好；复苏时37度快速融化。

king8

不是双抗的问题，尝试下梯度降温冻存，冻存液中的，二甲基亚砜可以调低到10%，血清浓度调高，试试。

mrhighly

跟2A没关系，复苏时多用培养液稀释下能少残留些dmso，培养液温度ph值geletin处理都会影响feeder的状态。

司小可儿

回复 nichifanlema2 的帖子. ~3 n, e  L' ?2 ~3 J

: u# Y2 n7 `6 |8 x0 C% s" @# _; C" y我是买的成品MEF，复苏的时候说不用离心，直接转移到培养皿里的

yeshch

有两点想说：第一，二楼说的冻存液配方略不同：我们是FBS:DMSO：medium=3:1:1（其中血清比例可根据实际情况适当调高）,而二楼建议的是FBS:DMSO=1:1。第二，你说的“不用离心，直接转移到培养基里”，个人认为可能有问题，冻存时加入的DMSO直接转移到培养皿里对细胞的损伤还是很大的，建议复苏时将细胞转移到5-6mlD10里离心后接种

smile微微笑笑

我想问一下，楼主饲养层细胞是用MMC处理的还是辐照，冻存再复苏后，有没有出现过细胞依然增殖的现象！

细胞海洋

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( |' Z( y! {6 G
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司小可儿

回复 smile微微笑笑 的帖子9 R5 q" Y* l* W
  k+ U3 q$ h) D. N, v  C7 t
是辐照的，目前还没看到增殖的现象

司小可儿

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# `4 d* B  [' j& j' y, z! ^( ~9 U; L* A" Q
好的，谢谢