干细胞用流式细胞仪检测凋亡

zqh1

     请问，有没有人做过肿瘤干细胞球的流式检测？平常我给干细胞球传代时，就是简单吹打一下，或者用稀释为0.125%的胰酶（碧云天）短时间消化一下，把干细胞球消化成小一点的细胞球，因为消化得太完全影响细胞状态。
- b1 r3 A1 L0 k' x0 @+ E      但是流式检测需要消化成单细胞，这样胰酶消化的时间就很长，为了把大的细胞球消化开，就存在消化过度，还有就是消化开的大细胞球最里面的细胞可能也已经凋亡。所以每次测凋亡时，空白对照的晚凋都很高，在10-15%。请教高手指点！

Tracy-Cui

原来做其他细胞的时候遇到过细胞团的情况。胰酶消化一段时间后可以在显微镜下观察，细胞飘起后即时终止消化，一般这时成团的细胞很容易打散；收集细胞后可以试着多离心重悬几次，吹打的时候可以多吹打几次，不过要注意操作轻一些，以免细胞损伤；流式检测的时候会在Vortex上震荡，细胞应该就已经打散了吧！* g9 b; ^( v7 j& G
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做其他细胞时的一点小见解，希望能对你有帮助！

zqh1

回复 Tracy-Cui 的帖子9 X4 V" e, g9 d. s/ m
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感谢你的帮助，今天又去做了一次流式，细胞团不多，所以没有用胰酶，机械吹打，结果凋亡率依旧很高，实在是太伤心了

pauldong

可以变消化变机械拍打，或者低速率用漩涡混合仪，都有助于细胞团散开，消化的时间要掌握好，机械方法只要力度不是太大，对细胞的伤害是没有多大的

随时准备下线

回复 zqh1 的帖子1 V1 A* i$ c. H, r3 \3 ~2 K

5 ]( ~. L$ n. Q! X肿瘤干细胞？你培养的是分选之后较纯的肿瘤干细胞？我曾经做过肿瘤细胞凋亡相关流式检测，效果都还可以，细胞团应该是跟你的细胞种类有关，按照你的操作方法，胰酶消化应该影响不大，更大的可能是你的细胞状态本来就不好。还有流式检测，抗体标记前，如果细胞团太多太大，应该会影响抗体标记，同时检测的凋亡结果也不准。最好制备为单细胞悬液上机。

yeshch

消化细胞球的话，建议每消化两分钟就将消化下来的含单细胞的上清吸出来终止，然后向剩余的细胞团内补加胰酶继续消化；这样分步多次消化获得的细胞状态都比较好