脐带间充质干细胞的分离

smile微微笑笑

1、无菌收集脐带：在超净台内将脐带浸泡于含有1%（v/v）庆大霉素的生理盐水中，除去脐带外表及内部残留的血液，洗净后将其剪成约2cm长度，用镊子撕开羊膜（最好从两根动脉之间）一次剔除两根动脉，一根静脉，再用有齿镊子提起胶体，顺脐带轴方向剪成细长条状，再剪成1-3mm小块；0 C& r- f* r) m. [
2、酶消化法：消化前将组织块用生理盐水冲洗两遍，剪成肉泥状，转移到50ml离心管中，加入消化 也（组织：消化液=5:3 体积比），混匀，37℃中消化2h，每隔30min振摇一次。加入10倍体积的生理盐水稀释，500r离心3min，取上清液，然后将上清液用2500r，离心10min，取沉淀，将沉淀用Cayden（10%FBS）重悬，将混悬液加入六孔板中，37℃，5%CO2培养箱中培养，次日能在显微镜下观察到贴壁细胞，半量换液后继续培养，3d后换液，细胞能够稳定生长。每三天换液一次，至细胞生长铺满瓶底，即可进行传代。0 W- `2 x% W2 b% w' g2 H/ y
3、组织块培养法：将剪碎的组织块均匀铺于六孔板中，间隔1-3mm即可，倒置六孔板中，放入孵箱1.5h左右取出，见组织块已经粘附在培养皿底部，延边缘缓缓加入培养基，注意一定不要将组织块冲起，要让培养基逐渐蔓延整个培养体系，放入培养箱，3d后上镜看，如果有细胞沿组织块边缘出现后可以间隔3天换液了，等到组织块周围细胞呈集落生长，可以传代了。

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4 g" b3 u+ c; C 真对不起，犯错了，误导你了，是Cyagen （赛业）培养基，一种专门培养间充质干细胞的培养基~