MSC消化不下来，怎么回事？

309208770

MSC培养，80%-90%的融合度，消化很容易。过一天本想收集更多的细胞，融合度100%或是更高一点，就很难消化，消化时间就算很久也消化不下来，只有少数能消化下来，镜下还是很多细胞贴在瓶壁上。试问细胞融合密度过高时，会不会自身产生一种物质是胰酶作用不了的？培养液是LONZA，胰酶是GIBCO CTS级

yooung

那就不太清楚了，我也遇到消化融合度为95%以上的细胞的情况，但是是大部分消化下来，不像你这样只有少数下来。也许你的胰酶浓度比较低，作用于单个细胞的胰酶数相对过少，这样就可能消不下来了。

smile微微笑笑

我也遇到过这种情况，我之前会将PBS和胰酶在37℃预热，PBS洗细胞两次后再用胰酶消化3min后，效果会好些

jenny114402

胰酶浓度低，再不就是量不够，或胰酶刚从冰箱里拿出来就用了，我们细胞都长得很满之后才冻存，我们用的是0.25%含EDTA的猪胰蛋白酶

pauldong

回复 309208770 的帖子4 g& W+ X7 ]1 R0 {1 d
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细胞长过了，要加大胰酶的量，另外可以调整下胰酶的浓度，然后就是讲胰酶37度预温一下，或者加胰酶后放入37度培养箱中进行消化

zhangjieyctc

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这种情况以前也遇到过，你可以在消化过程中稍微晃动一下培养瓶，使胰酶与细胞更充分接触就可以了，效果挺不错的，可以试一下

晗晗

消化时间不够把或者时间太长

月_幻影

不知LZ在加胰酶前有没有将残留的培养基用PBS洗干净？9 ?, {* X3 R1 Q
胰酶在冰箱中取出后有没有37℃温一下？
0 l7 `/ y4 J0 V2 H" w( j消化的时候可以将培养瓶放回培养箱在37℃的情况下消化、消化后可以适当拍打培养瓶帮助细胞脱落下来

草胞

你是血清培养还是无血清培养，胰酶浓度，温度都有影响。

309208770

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我就是放在室温的，加大量也不行，适当延长时间也无济于事