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标题:
［求助］这份PBMC怎么回事儿？
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作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 11:10
标题:
［求助］这份PBMC怎么回事儿？
事情是这样的，我用同一份脐带血提的PBMC，分成两组，第一组加的是可溶性的OKT3，第二组是包倍的OKT3。但是发现在我把第一组PBMC加到瓶子里面之后，过了仅10几分钟，就有很多细胞贴壁死亡了。虽然我们原来做的PBMC有一部分肯定是也会贴壁，但是都是正常的单核细胞贴壁，折光度很好的。这次这个都是黑色的死细胞，而且死亡事件太快了！如果是细胞问题的话，另一份加到包倍后的瓶子里的细胞就没事儿。求解……
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% L- I" [3 b. A
上图是第一组
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[attach]77681[/attach]
2 V% J* B+ E1 y( t5 U$ d3 m7 E
这是第二组
9 p& L' A: B1 }+ O2 T- j1 C* L
作者:
lgfffancy
时间:
2016-5-13 12:09
污染，很严重的污染
作者:
baby00000003
时间:
2016-5-13 12:38
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lgfffancy
的帖子
/ M* ^4 i& i; z a* y6 H4 G0 ?1 V
$ h: I9 A% o! h
这是如何看出来的呢？
作者:
张月儿
时间:
2016-5-13 13:34
那应该就是可溶性的OKT3的问题了吧。污染也不会那么快出现死亡吧，应该不是污染的问题。
作者:
veda327
时间:
2016-5-13 13:39
这样我想起了一份洁净车间培训资料里面的一个细菌2小时可以变成281兆个细菌的表述
- u7 @6 V0 m! [/ S7 r( \8 h
. H- z9 F4 i8 G5 C$ Y! R5 s
我觉得应该是含有可溶性OKT3的培养体系的问题，里面含有强致死的毒性成分、溶液的pH不对，或者溶液的渗透势不对等！
作者:
veda327
时间:
2016-5-13 13:40
黑色的是细胞碎片、或者是培养体系里面某种成分的结晶
作者:
momoenn
时间:
2016-5-13 14:08
你这两个图片是怎么来的啊？你说的死细胞黑色是染色了吗？看不懂你现在细胞第几天了？没有看到实物，单看单个细胞形态和聚团情况，如果这是第2-3天的镜下直接观察的图像，好像第一个状态要好一些
作者:
hello_yun雨
时间:
2016-5-13 15:15
试剂不会是过期的吧。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:11
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momoenn
的帖子
# n3 H# {: }- _5 z8 f
% L! o' y# c2 e
这两个都是D0天的，没染色，那些黑色的就是死细胞。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:11
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hello_yun雨
的帖子
, x( w" L" {( f5 }/ F- u
8 p! p; ?7 q4 [- C6 M* P4 B |! ]0 q
试剂肯定不会过期的，都是4度保存的，刚分装好的。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:12
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veda327
的帖子
) q+ E' m5 D }5 y
+ F/ v. ^9 D& D
黑色的就是死细胞，可能还没到碎片的那种程度。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:12
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veda327
的帖子
4 n9 t5 i3 U* ]/ v
9 J' }% ^# V& r. x
但是原来我们也是这么操作的，问题是，就算我OKT3加的量多少，不可能刚加进去没几分钟细胞就成这样子啊
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:13
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张月儿
的帖子
! e+ v" H4 c: s( ^6 R
" p- R2 m3 p! |: e
但是我用OKT3包被就没啥问题
作者:
lgfffancy
时间:
2016-5-13 16:47
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lgfffancy
的帖子
/ `0 [% m O/ E @- g/ i! s% B
4 t" k( s" h7 {$ {% M
我以前养细胞液出现过这样的情况
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-13 16:58
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lgfffancy
的帖子
% I. ^- g+ ?$ z6 e& z
/ a6 t' n4 {! ~8 @3 w
怎么解决的？找到原因了吗？
4 @4 ]% i) I# a* J0 u# `) |
作者:
lgfffancy
时间:
2016-5-13 17:13
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nailute1985
的帖子
: H6 N! V8 Q. e# G% V, U/ p
$ @, E, [2 t# I% {5 ]
我那个就是污染，用解决污染的问题就行了
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-14 00:24
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lgfffancy
的帖子
' J9 O; `2 J2 M! q b4 Q
+ W% S9 s( c& R7 u$ _3 \7 J) Z' w
我这个肯定不是
作者:
sithbj
时间:
2016-5-14 11:47
那些碎片是细胞残尸。是否污染，取些上清，加新鲜培养液。过夜，镜检。如污染，就会大量长出的。
作者:
wuhuaguo88l
时间:
2016-5-14 11:53
细胞死的太快了，是我不得不怀疑你的培养基是不是有问题，可以想象一下，细胞在十几分钟就开始破裂了，细菌污染是不会这么快的，你是不是加错了一些东西，如DMSO等引起细胞裂解的物质。
作者:
gxbzjznn
时间:
2016-5-14 19:39
不理解你表述的贴壁死亡是个什么概念？
作者:
奇幻雪蓝
时间:
2016-5-15 09:57
确定黑色的是死掉的PBMC的方法是什么？从图片感觉分离的PBMC纯度不高？不知道你测得纯度多少？
# U) ~) j9 v8 h% @5 e- {
5 y% c8 E+ }! _# q: v/ z
作者:
奇幻雪蓝
时间:
2016-5-15 10:06
十几分钟就鉴定出来了？这也太神速了吧，什么方法？
作者:
gjs
时间:
2016-5-15 11:29
第一组的试剂重新配，特别是可溶的OKT3，确定可溶的OKT3没问题。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-15 16:56
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奇幻雪蓝
的帖子
- G* q+ t, N2 z+ T
6 q0 t+ `, s1 t
细胞形态啊，这马上就能判断是死的细胞啊。。。什么叫做PBMC分离纯度？本来PBMC就不是纯的细胞
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-15 16:58
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gxbzjznn
的帖子
|/ {2 ~6 o: Q! ` i1 Z4 e9 P
- L/ U# Q. Y3 g. c; J7 H( |3 X
贴壁的PBMC如果是活的话，折光度很好，而且只是不会移动而已，这个黑色的难道不是死了的细胞么？活细胞就算贴壁尤其是PBMC的话 也不是这样子的啊
' O+ k3 Z' x9 b" W) r
作者:
我是传奇
时间:
2016-5-16 12:15
你说的这个应当是贴壁的，但不见得就是死了的，包被的会比较匀称，不会出现细胞过度集中的情况，可溶的媒介是什么，若果添加因子未混匀的话因子也会逐渐沉降（无论TC处理或未处理的容器），形成局部细胞浓度过高。逐渐会死，但不会你说的这么快。
作者:
quanquan326
时间:
2016-5-16 14:59
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我是传奇
的帖子
* d6 M6 i% ^+ J6 ^+ R x# _
" N6 v) |0 \2 H. J. A
很对，赞同
作者:
momoenn
时间:
2016-5-16 16:57
你的细胞现在怎么样了
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-16 22:23
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momoenn
的帖子
+ P% A6 k' N( H" `8 U. Z- ]
+ f* k1 i% K8 O5 ~" f8 v: p3 N
还行，不错
作者:
zwlcxx
时间:
2016-5-17 10:10
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nailute1985
的帖子
3 M- ~8 x, {) T; J& c
1 b% l# Z" y- @
您这两份细胞，第一张图应该是25倍物镜吧，能看出细胞碎片，可能是血浆里的成分，血浆是不是经过灭活后没有离心彻底？第二张图是4倍物镜，细胞密度略大，看不出瓶底的杂质。两份细胞看起来都是正常的。
作者:
nailute1985
时间:
2016-5-17 12:45
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zwlcxx
的帖子
: v3 ^& Y3 |, m4 a( [) m9 e: P
" r, x1 v. K' {6 c0 R" k5 F
两个都是10X 而且我没加血清，我用的是HSA
( H8 P) s4 ~1 h& M D9 J
作者:
ALBERTSIGMA
时间:
2016-5-17 14:57
试剂问题吧。。不然不会死这么快的
作者:
ALBERTSIGMA
时间:
2016-5-17 14:57
试剂问题吧。。不然不会死这么快的
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