CIK细胞因子具体作用机制

Liyun65

常规培养人外周血单核细胞，都是加入CD3，IL-2。检测表型CD3CD8、CD3CD56双阳性，不知道CD3的具体作用机制是什么，为什么加入CD3刺激，会产生CD56，还有CD3如果过度刺激，会不会导致细胞凋亡或者不表达CD3。/ H" c* Z* n6 V" K3 j
一般培养CIK，是培养多久，14天，还是21天，还是增值多少倍就行了，是细胞到14天后就进入平台期不增值了，还是要达到多少倍就不增殖了呢？
* ]: P8 O! _( O4 j% [2 A最近做CIK，遇到太多问题，不知哪位大神可以帮忙解答，万分感激

yingfeixiang

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CD3激发型单抗：  T/ @" K9 t2 O* U5 c" ]
T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体，即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合，也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体，在T细胞表面，其与CD3分子通过非共价键结合，形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等)，最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-g等)，引起基因的表达和转录，T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。: S/ @3 V% B. P% D# i2 }* i8 ~
由上可见，CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后，可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化，进而导致T细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使T细胞增殖和活化。也就是说，CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。0 W: ?! j& f6 F5 h7 H* b. W
此外，CD3激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。研究表明，仅克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗可以刺激所有人的T细胞的增殖，而其它克隆号的CD3激发型单抗仅能刺激一部分人的T细胞。因此，在进行CIK培养时，最好选用OKT-3克隆，以保证每个患者的T细胞均能被激活。

Liyun65

回复 yingfeixiang 的帖子5 q1 _+ |5 U. K9 f5 y

6 |$ u& l9 \% g0 }5 c. l谢谢你的回答，学习了，感觉很缺乏这方面的知识

生物太次郎87

根据我自己培养几百株CIK的经验来讲（纯粹个人观点），CIK在15d左右，增值能力达到最大。之后增值能力减小，到21d左右，就是平台期了，要么回输做临床研究，要么冻存。我自己也做过小实验，21d后还继续传代，细胞长势很弱，无意义，即浪费时间又浪费物料。若有需要，可以相互讨论。