细胞消化问题

晗晗

最近用胰酶消化细胞5分钟发现细胞消化不下来是怎么回事啊?还有今天我离心的时候发现细胞没沉淀啊,怎么是悬浮的像细线是的,是染菌了吗,但是我在镜下看没染菌就是细胞有点多,到底是怎么回事啊,求个位大神指教!!!!

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姨酶的最佳使用温度是37摄氏度，如果时间培养长一点或者是细胞偏多，消化的时候会有点困难，需要用手拍打瓶壁细胞才会脱落，我们消化时间是不能超过两分钟，因为姨酶对细胞是有损伤的；出现絮状是细胞结团的结果，至于你的细胞没有离心下去，那就是你的转速不够或者是你的离心时间太短，也有可能是你离心机的问题，希望对你有用。

理科小文艺

如果胰酶不是为了长期保存，建议常温放置，细胞加入胰酶后放入培养箱里，1-2分钟ok。一般离心机离心参数800-1500r，3-5min.9 d& F; b1 g2 i& k" M: P

zhouweixing000

1、胰酶是否失效、是否在37摄氏度下消化、消化前是否将培养液洗净0 c( J0 Y1 Q9 E( V) T: U* U
2、在你确定离心机转速够的情况下，就是在消化的过程中细胞间连接没有完全打开，导致缠绕在一起，看起来像丝线一样缠绕

splinkerette

回复 晗晗 的帖子5 J3 l0 k+ l' k; f! S. l
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我的经验是胰酶会随着时间的推移慢慢效果变差，特别是稀释过的胰酶。这个直接换一瓶新解冻的胰酶就好。5 G& q; \7 ]5 _
至于细线状的悬浮物，优先考虑细胞破裂，DNA溢出

LVXUEYAN1101

1.消化之前先用PBS或者生理盐水洗一下瓶子，消除培养基中血清的影响7 f4 w/ t3 j% M  B* u! s4 ^9 V) m
2.胰酶37℃预热，消化也在37℃进行
2 \+ l- ^* }3 i7 ?9 \) r3.换一瓶新的胰酶试试

风倾颜

消化前用生理盐水洗一下培养瓶，胰酶需要37度预热，消化37度需要1-2分钟即可，消化时间长会影响细胞状态，离心一般1000-2000r即可

zhx1912

对于难消化的细胞最好将胰酶提前预热，消化前先用PBS洗一遍细胞，并将PBS弃去，然后加入1~2ml胰酶浸润30s，然后将多余的胰酶弃去，仅留少量胰酶覆盖细胞即可，将培养瓶放在37度培养箱，1~2min，最多不超过5min细胞即可消化充分，然后加入新鲜培养基终止消化，按比例进行传代或者扩增，可以省去离心环节9 o$ a- H% L9 z, B2 u8 h1 |3 U- o0 `9 P
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个人认为离心对细胞的损伤相对比较大，如果残存的一点胰酶对细胞贴壁没有影响，完全可以直接传代