干细胞计数活性低

yingfeixiang

间充质干细胞计数活性低，显微镜下看着长得很好，传代后仪器计数活性很低，不到90%，仪器是count star ,什么原因呢

saliai2016

Counstar焦距一般是固定的，除非仪器移动过造成焦距变化，看不清细胞，不用动焦距的参数。如果第一次看新类型的细胞，尤其是特别小的细胞，可能是因为放大倍数的关系，视野里的小细胞全都是蓝色的小黑点，但是其实在更大倍数的光镜下看是光亮透明的活细胞，这就是细胞大小超出了counstar检测的大小范围，不能用这台仪器检测。
0 _7 @8 x; U3 e, J用counstar计数发现活率太低，先观察视野中是否出现大量的台盼蓝杂质；然后再看counstar配套的软件圈门是否恰当：% R" _; ~' v$ f7 |/ o' N
1.        看细胞大小的参数设置是否合适，参数不合适，软件会把过小或过大的细胞判定为死细胞；
' @# C; s& ]5 d! o* \! W; {2.        是否把活细胞判定为死细胞，这一步只能靠操作者本人的主观判断，细胞内部染色多深才算死细胞，细胞的蓝色边缘多粗算死细胞，调alive dead参数直至合适为止
& @  K6 J5 ^/ {; R2 s

独自等待

调countstar程序参数，alive dead 参数重设至0.5 ，原因就是电脑把稍微染上台盼蓝的细胞当作死细胞了。建议镜下手动计数和活力，手动是最准确的，如果活力正常就说明细胞没问题，还是countstar的问题。

LVXUEYAN1101

我自己手动计过活率，差不多也是这个数，估计跟胰酶消化过程中对细胞的损害有关。

2357710447

1、可能是消化过度，导致细胞死亡，计数默认为死细胞   7 `5 H  r7 P9 Q
2、细胞量太大，没有吹散均匀，聚团或者过大计数仪不能识别2 ^: b6 a3 C1 J$ i% [
3、计数仪的计数模式有小细胞和标准细胞，稀释比例有不同，需要调整正确
1 j+ [$ w7 W( j1 t0 G9 ~! J1 @4、有些胎盘蓝有小颗粒沉淀，用时需要过滤，静止后用，在细胞计数仪下默认为死细胞，影响活率, v1 h$ v0 T3 M1 D& [/ Q+ f
5、你可以重复几次做对比，取平均值看一哈) C9 B! S% K3 a# Z. k( ~' Z# @
个人经验，希望对你有用

yingfeixiang

回复 2357710447 的帖子
2 `' A, a, ^$ b2 P+ p/ V3 ~: o& [3 E/ F$ x3 P. X* a& U  V
谢谢

2357710447

细胞计数仪是全自动计数的  一般不会有什么大问题   有可能是你姨酶消化过度    还有就是如果你的细胞密度过大   是会有一定的影响   另外一个就是胎盘蓝   计数的时候有个稀释倍数和细胞模式    看你选择的是那个稀释倍数   是标准细胞还是小细胞模式这些计数出来都是有影响的     最后一个是胎盘蓝    有些胎盘蓝差一点的是会有细小的颗粒       用的时候需要过滤  使用的时候尽量不要用力摇动    防止吸到颗粒杂质    细胞计数仪会把那些小颗粒默认为是死细胞     希望对你有用    个人经验

阳光正暖

回复 yingfeixiang 的帖子
& C4 J; }/ \0 c2 ^3 t* O! \& q- G9 q/ D+ L1 u; t3 S9 m
胰酶是一种蛋白酶。通过在特定位置上降解蛋白，使细胞间结合处蛋白降解，这时细胞由于自身内部细胞骨架的张力作用下成为球形，从而使细胞分开。
1 ]7 y9 J1 m6 [2 y      不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2 、Mg2 和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2 、Mg2 的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。8 ?: K7 w: y& r4 |& T

yingfeixiang

回复 蚂蚁上树 的帖子8 L9 z0 C. g7 V# a2 O% J

& W- O% {& Z( r8 q5 i% X8 e只能对比一下了

yingfeixiang

回复 yanwu_1 的帖子
2 G; ~+ g: g. U4 r7 e0 Y( c9 u3 l$ G9 }# c6 B" z
焦距自动的