有什么方法能让组织块贴壁贴的牢固

yangyaping

有什么方法能让组织块贴壁贴的牢固

hyyh03271016

培养基最好采用少量多次的方式加入，加入新的培养基之前可以把旧的吸出来~~~

晗晗

尽量不要使劲摇晃培养皿，还有就是在消化加胰酶，PBS的时候不要使劲吹打，要尽量打在皿边缘，还有就是在换液的时候要轻一点避免吹掉组织块

pekingxiaoe

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详细具体的讲最好用，25平方厘米的flask，组织块用大圆刀片，剁的越碎越好，让后先让组织块被培养基浸湿，然后用玻璃吸管将组织贴附在瓶底，然后将瓶子树立放10分钟左右，让组织块贴牢，然后在瓶子竖立的情况下，加入4ml培养基，沿没有组织的一面，加入到竖立状态下的瓶底，然后非常缓慢的放到flask,让培养及慢慢没过组织块，前3天最好都别去碰它。过三天再看看有没有细胞爬出来。哎呀累死我了

康会彦

学习

kiss2346

一般都是刚分离时候少加培养基，也可以向前面朋友说的先干贴再加培养基，个人感觉少加培养基就可以  ，换两次液基本上就都贴上了

fenlichong

可以先用猪明胶或鼠尾胶原铺板，然后加入组织块，有助于组织块贴壁，具体使用浓度可参看产品说明书或结合实际情况，效果还不错。

edwardellen

尽量避免组织块有过多的外来水，比如多次洗涤，有大量的PBS或者生理盐水，# P" f  F# O0 n$ U6 }: P- h
组织块要处理的小，不论是剪还是用组织处理器，挑小块的做贴壁，最大也别超过3-4个立方毫米，. o. n3 \- E& J! Q
根据组织块的湿润程度，判断一下静止的时间，一般怎么也要1小时以上，但也不要太久，时间久了就干了，贴得牢但是不会有细胞，
  a3 D6 E8 c1 ^加培养基的时候稍加一点，刚刚没过组织块就行，之后3到5天再补，
# j' D) r$ _& f5 c; H% c组织尽量少接触双抗，抗生素会让细胞不愿意长，真的

独自等待

剪碎时加入少量完全培养基，然后铺皿，培养箱内放置过夜，组织块就会贴牢，第二天补液加入完全培养基正常培养换液，弃液过程要轻柔，吸管绕开有组织块部位，补液时避开组织块以免培养基冲掉组织块。

sfnana

将组织块剪碎，均匀的贴在培养皿底部，倒置在培养箱内4小时左右，观察附着于组织块周围的培养基基本都干了，取出培养皿，缓慢加入新的培养基(尽量在没有组织块的培养皿边缘加液)，轻轻放入培养箱，前3-4天不要移动培养皿，只要保证培养液没有被污染即可，不需要镜下观看。第5天左右，轻轻取出培养皿，半换液，在拿出的过程中要轻拿轻放，并注意观察没有贴壁的组织块，在换液的时候，吸出，丢弃。同时可以镜下观察，一般这时候，细胞还不会爬出，但是组织边缘出现会向外扩散的趋势。一般8-10天细胞爬出。