细胞复苏需要离心吗？

yinchong42

我感觉，如果细胞量比较少或者细胞比较脆弱容易死，那么建议还是不离心，复苏以后多加两倍的培养基，DMSO稀释到0.5%-1%的情况下对细胞的杀伤毕竟有限，
+ C- ~8 K& h& O( ^: E  N. }2 d, x. F: R4 k/ q* k
然后依照细胞的贴壁速度而定，像有些细胞比如MC3T3-E1之类的细胞，2个小时就基本上倒不掉了（不过我还是会等到三个小时，因为按照我的经验，如果每次都刚刚贴壁就把细胞倒掉，长此以往，不易贴壁的那部分细胞就会被淘汰掉，这样就会影响细胞株的形状了），这时候直接换液就行，然后过12小时再换一次液，这次换液以后，一般来说细胞生长状态都不会太好，这时候等细胞密度到70%左右时，把细胞消化下来重新贴一次壁，长满了再传代之后就可以用了，，，

baby00000003

回复 zhx1912 的帖子9 R. C3 P$ A0 c" m

) F: H! g* M" Z3 chttp://www.zenoaq.jp/cellbanker/en/stem-cellbanker-dmso.html
/ g8 S* t3 T+ m- b# T. Q, r比如说这俩吧，曾经有人跟我推销过，未亲测

zhx1912

回复 sunny2829 的帖子8 y4 j5 }$ s' }  d$ f
% }" n9 Y0 K7 A8 v1 j  S; _7 M
这个毒性是对于细胞长期的生长有毒性还是仅仅在复苏后的几代有影响呢？我养细胞的习惯是贴壁细胞复苏时不离心，复苏后24小时换液；悬浮细胞直接复苏，DMSO被稀释到0.5%，细胞生长达到丰都后再稀释传代，DMSO已经接近0含量了。细胞生长以及活性方面都挺好的$ A1 }5 |; u5 Z4 h- U0 b
' U6 l. \1 B# {& h9 l- ^/ s0 G
养细胞也有很多年了，一直都是这样操作的，只是最近接触干细胞，好多细节不是太明白，想向大家多了解了解
+ I4 N6 q) b9 v" ?1 Z+ P8 I5 _8 d

zhx1912

回复 yingfeixiang 的帖子
! i$ D/ {/ _1 \: S
0 `4 E" T! N  h3 N- M: \谢谢！

zhx1912

回复 baby00000003 的帖子0 t# y* f4 @$ F2 i/ l8 p# L

. ?5 C0 g# t8 o" v% v+ Q# ^6 i还有不含DMSO的高级冻存液，能告诉我品牌和货号吗？想了解了解，谢谢了~

zhx1912

回复 watchen198891 的帖子
& m; N$ {& |1 [. g. h- m
4 T" S' L1 ]: x谢谢你的建议！我认为离心对细胞损伤大过DMSO的毒性，所以对于贴壁细胞一般是复苏后换液

watchen198891

回复 zhx1912 的帖子% ~2 B& \* _' Z$ c/ @/ f! C

! c. h- G: A4 v对于MEF细胞，可以离心也可以不离心，两种方式，如果不离心，就要在细胞接种后加入少量培养基，培养4-6h后换液，补充新鲜培养基。对于ES饲养层培养，必须离心，但是离心转速以及时间尽量减小，避免对ES过度伤害。

baby00000003

有些个细胞复苏培养，不讲究的时候可以不除DMSO，或者用的是不含DMSO的高级冻存液，就不用离心啦～
; i/ ]4 Q0 F5 G' I' G7 u至于你说的这些，可以试试看嘛～也许就能出一套新的protocol～

yingfeixiang

复苏细胞一般都离心除DMSO，因为DMSO具有细胞毒性，对细胞有一定损伤。特殊要求除外

sunny2829

回复 zhx1912 的帖子
6 @( e1 E7 H& v+ r9 w
5 J, J9 V3 ~& J/ p我们一般复苏细胞都离心除DMSO，因为DMSO具有毒性，对细胞有一定损伤。. u5 z% ?& k2 s, l, k9 {5 Q
个人建议能离心还是离心吧。