关于茜素红染色

城墨

第三次染色了，每次成骨诱导都是大半个月时间. K$ t% g  _# e) B+ y
今天是第三次染色，依旧什么都没有9 A# T1 U: e- d& \2 {% _5 W
我的做法是，MC3T3-E1细胞，在VC和甘油磷酸盐的成骨诱导下14天。
  I: o% `+ Z$ K) p% |" l. [1 x6 y做AR染色，先PBS洗细胞，再95%乙醇固定10min，再蒸馏水洗三遍，最后茜素红溶液染色。$ `! c" N- f0 w  b) o
问题是茜素红我已经用过很多种了，买来的，索莱宝0.2%的，没染出来；自己配的，sigma粉末，0.1%，PH 8.3，用Tris配的，还是没有；1%，直接用蒸馏水溶解的，依旧很淡。" t; A, |" ]2 H1 ]6 M
感觉镜下能看到钙结节啊，是不是那种致密透亮的？
  j4 W5 o& w9 U0 I不知道哪里出了问题啊，我还打算染MSC呢，这个染色一直做不出来，真是让我太烦恼了

qiqishichaoren

我是用4%多聚甲醛溶液，固定20～30min，洗的话都是用PBS。我想你的问题应该茜素红的问题。我买的赛业的，染液是送的，效果很好。图传不来

zhen022

这个我也试过很多，最后发现还是用alfa asar的那个茜素红好用，配制的时候0.1%或者1%浓度影响不大，主要是pH，我们用双蒸水溶解茜素红，然后盐酸调节pH4.0-4.2之间都行，记住pH一定要准确。染色的时候，要是明显的，几分钟就显色了。