NK贴壁

xieyun20052005

NK细胞十天之后会结团贴壁，正常吗？怎样才能不贴壁，怎样能避免这种现象，求解谢谢

gondobar

贴壁分情况：
' t7 j+ i' c0 b* T1.若是贴壁后，细胞扩增减慢，细胞活率较低，说明细胞已经开始衰老凋亡，修改培养体系。
0 A6 I0 [, `5 W& F- `  ?7 r* B2 ~2.贴壁后吹散继续培养，细胞扩增正常，细胞活率正常，只需要定期捶打即可。

xieyun20052005

回复 gondobar 的帖子+ t2 y9 ?& c- @; u7 {/ `2 x, S3 W

. q/ N% E6 I: F想再问您两个问题：一：如果是第二种情况的话这些贴壁的细胞是NK细胞吗？这种体系的话能养到CD16CD56含量多少？第二就是十天之后细胞形态就会不规则，不是大而圆的细胞，而是有些分叉的细胞，有的就像小的间充质一样存在，当然也有大而圆的细胞存在，不过补液时一吹散大而圆细胞还是存在的，这是怎么回事呢，是因为要凋亡了而形态不好了吗？

gondobar

虽然NK是悬浮细胞，但是由于重力作用也会沉积在培养瓶或培养袋底部，培养瓶本身是处理过的，有些贴壁很正常，如果贴壁严重可以考虑未处理的培养耗材。形态不是特别好看，但大部分细胞是Nk细胞，吹打或者计数时细胞就会变得比较圆呼。用细胞因子养 CD16CD56双阳能达到70%左右，滋养层能达到95%以上。细胞培养中细胞形态差异比较大，不同的培养体系培养出细胞形态不一样，NK常用的几种培养基，加入不同因子细胞形态不一样，且不同人的血细胞也不一样。例如DC细胞，你可以试试加入自体血清，胎牛血清，血清替代物，细胞差异很大。

xieyun20052005

回复 gondobar 的帖子  N) U$ O8 |' S- Q# n
# S- D7 U' w$ h) e5 b+ x
非常感谢，请问一下NK的培养基用哪个比较好呢？我现在用的康宁的，是不是不是最适合的培养基呢，可以问一下多少天因子法能达到CD16CD56  70%呢？

阿秀哥

十天？都已经转袋扩增了吧

xieyun20052005

做的试验，每次就是取出几分之一继续做; ?# H3 y& L/ J6 W) z* R0 d

阿秀哥

NK细胞不是贴壁细胞啊，就算培养瓶或者培养袋底部有细胞，也能很轻易的吹打下来

liuyanly35

想问下你是用什么培养NK细胞的？是不是你用的培养瓶底部有吸附剂呢。