BMSC原代培养

苏木素黎

大家好，我是个培养骨髓间充质干细胞的菜鸟，到目前为止，做过三次原代培养，都不成功，遇到的问题如下：首先，我的杂细胞很多，一只SD大鼠可以分到3个60mm的培养皿中进行培养，里面很多杂细胞，应该会影响BMSC的生长吧，其次，细胞形态也不对，不像文献中查到的那种规整的呈旋涡状的梭形，到2代或3代的细胞就跟老化了的细胞似的，细胞很大，形状不规则，折光性弱，立体感渐渐变弱。在这里请教一下大家，是什么原因造成的？; l& u" e0 S# p- m" e. |. X
我用的是全骨髓贴壁法，血清为BI的human MSC专用FBS，现在已更名为MSC专用FBS，全培基含血清10%，培养基为Sigma的DMEM/F12粉末，自己配制，用前加双抗和丙酮酸钠，培基，PBS，双抗，胰酶等均为自己实验室配制的，用来养癌细胞和RAW264.7细胞也都可以，所以说试剂是自己配制会是原代做的不成功的可能原因吗？血清是2014年12月12日分装的，没有过期，一直保存在—20℃的冰箱中，这个有影响吗？期待大家的建议及意见，先谢谢啦！