干细胞培养污染问题

孤独的吻

大家好，我现在做人脂肪间充质干细胞的分离与培养工作，取脂肪是无菌操作的，然后拿回实验室进行分离纯化，在培养过程中发现有很多“小黑点”，但是培养基不浑浊，细胞生长速度不算快，特别是年龄大些的人，年轻的还好，原代培养要10天，3-4天传代，1：3或4，仔细观察黑点有两种，一是大些的像细胞碎片，另一些在200倍显微镜下看到针尖大小的黑点在动，有人说是支原体污染，哪来的呢？难道是从人脂肪自身带来的？更可恶的是每一例都是一样的。郁闷啊！请教高手！(*^__^*) 嘻嘻……

zpzp0312

虽然自己没有遇到过7 C4 C0 {3 \' @3 b! I- f
但大家普遍认为这种小东西叫做“黑焦虫”
  M; c! h0 v- q, N# l  |3 Y具体是否为生命体还没有定论
& f6 s4 U8 B4 {5 b; ~7 @9 \因为有人说是“硅化物”，有人说是“微生物”, B8 i4 o! j- Q' p
好像这与培养基中血清质量有关。
" b& j! m, P4 c如果遇到了，真是一件令人头痛的事。

have-a-rest

最好把图片传上来看看。
9 M/ A1 c; \+ X- \看到的黑点肯定不是支原体，支原体很小，但不排除支原体污染，可以通过PCR方法检测，有专门的试剂盒。
  l5 b; Z, |; F; M& w% z' Y7 e2 F" Z出现小黑点有多种可能：血清沉淀物，培养基或添加物来源，纯化过程中酶过度处理，细胞代谢产物，脂肪、血细胞或者细胞碎片都有可能。当然细菌污染也要首先考虑。

sailboat

会不会是你培养瓶的瓶盖上的东西啊？
, G  ~/ A  p" L% C+ T9 f/ S( }“小黑点”运动侧可能是黑焦虫；. k) I2 b- ~3 Z5 H3 |& X
若不运动，估计就可能是其他的原因

cortex

个人认为大的是细胞碎片。正如have a rest所讲，是酶消化过度的原因。在200倍下看到的黑点，因为你每一类都一样，可能是血清里的东西。不妨换一批血清试试。

sailboat

好像清除是比较困难的
) f  P) E+ s6 A' ~; F. L就算是救，也只能救活部分细胞3 J* C7 S+ y) R; [
一般黑胶虫存在血清中，空气中、衣服上可能也会有9 q8 Z% B$ c2 O/ [& T& J
你一开始培养时看到有小黑点吗？

笑可依

也许是死亡的非贴壁细胞，发图片看看才能进一步确定呀，还有细胞生长速度慢，会不会是传得太稀了。如果细胞形态、增殖状态正常，大可不必在意那些黑点。

老杜

对于我来说，这是一个很好的学习机会，谢谢各位

carfan

提问者提供的信息不够详细，不好判断，做干细胞研究最好全部使用进口一次性耗材和专用培养基，的确烧钱，但是和反复不知道问题在哪里而停步或者不幸中途污染相比，只赚不赔。经费不足条件不够，最好挂靠联合做。

uuwang

重新抽一下，应该能滤掉的。