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利用免疫磁珠分选干细胞心得体会!2 w S9 y I. k
1.基本步骤同说明书!
9 |4 H* c1 \. T8 { a2.分选成功如否!主要在于以下几点(个人体会):
1 g+ ?! [& M6 b) ~& g3 ]% oA.如果分选骨髓干细胞,那容易做。此处不多说。1 l; }" {) s# K* Y& Y+ G
B.分选组织来源,如心脏。建议首先要建立简洁的消化培养体系,一方面是看看分选前是不是技术熟练,可以避免正式分选时出现污染。另一方面,可以提高整个分选进程,使细胞的状态保持的更好。
3 E, f: c) \/ P9 [/ P7 \C.消化时,特别注意一定消化为单细胞,并且分别要经150目,200目,300目等筛网过两次,目的就是充分去除团块细胞或组织。这样作的最终目的就是保证分选时不堵塞分选柱子。8 ?9 m% { K8 v6 g F" B7 o! k7 U9 h
D.分选后的细胞,要用特定的培养体系,使其恢复到正常状态后,才进行后续实验。+ ^ V& M ]0 z) g0 n4 H* d
E.由于干细胞数目一般较少,因此建议新生鼠心,在取材时注意心房心室全部都要。因为心脏干细胞主要在心尖和心房。同时还需要至少需要50个心脏以上,才能分选获得足够的干细胞。从这一点,请大家注意一定明白特定组织干细胞在其组织的分布特征,便于有效的分离组织以获得干细胞。 |
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