用台盼蓝染色MSC以检测克隆形成 ？

steal

我按照文献，将MSC以10 cells/cm2接种在培养皿上，14day后，台盼蓝染色，数克隆数（>50细胞数为一个克隆）。哪位战友知道详细的步骤吗？
$ {: t, F# ~3 H! {3 q比如是把台盼蓝直接滴加到培养皿上，然后盖片镜下观察？
& w% O+ H4 J' s. K& s此外，结果如何判定？谢谢

jiefengbing

哥们 台盼蓝 不是染死细胞的吗 判断克隆 你直接在显微镜下拍照不就行了

yuangaoqian

我想问一下楼主，你所说的MSC形成的克隆是单细胞克隆还是细胞集落呀？

flyingpnmc

用结晶紫，方法网上自己查就可以。

mbjane

我也想知道答案

camel_stone

我用的是甲苯胺蓝

duanduan48

用龙胆紫染，可以到药店1块钱买个紫药水就好了！
: U3 p% t; A% S  H9 o! ~5 S$ d" l- e4 Z2 f# `# Q  Q, X9 C# W  q
大皿的话可以加1ml，染一分钟，用ddH2O洗几遍就好了！4 C( Y' r* Q, u0 Y9 M3 [2 z. R
% |9 p* b$ O* H0 l) u( i! t$ {
有克隆的话，肉眼就可以看到很多！

missyoudad

谁能再详细点解说下吗？

hawkyiger

1.制备单个细胞悬液
% H  L* t) r8 w- H, R2 w2. 将 有核细胞按（）接种到 T 25 cm 培养瓶中 , 于5% CO2 的 37℃孵箱中培养 5天。" ]8 m0 L; j; L9 I$ {
3.第5天换液，以后每 3天换液 1次。培养后第 10天于25倍倒置显微镜下计数成纤维细胞克隆。成纤维样细胞>50的细胞簇计为 1个 CFU－F克隆。
. N$ S7 C5 T; a- I5 D3 ?4.当出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加纯甲醇固定15分钟。然后去固定液，加适量Giemsa应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。  z& K6 k3 y0 B3 X$ ?  E
5. 将培养瓶倒置在显微镜(低倍镜)计数大于５０个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。

Yorkshining

回复 steal 的帖子, p7 M8 y/ D; v' x# P/ `6 ?
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请问一下，克隆形成率是检测什么的一个指标，如何计算克隆形成率？" Q# c5 r3 E, M