求教，关于部分NK细胞贴壁的状况

shy-shen

PBMC中提取培养的NK细胞理论上是悬浮培养的，为什么长到14天后，存在许多的贴壁细胞；这些贴壁细胞经检测也是NK细胞。是否可以用冰袋将这些贴壁细胞悬浮起来。会对细胞有损伤吗

gondobar

不需要冰袋，加入4℃培养基或者PBS吹打就可以下来。

shy-shen

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您好！  那些贴壁细胞是什么细胞呢？

gondobar

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  f4 O* P0 o' }! \9 [  ^+ K
8 L5 u) H8 ]% h0 O7 n- `做过流式 其实贴壁的很多都是NK（当然这也和你加入的培养体系有关），甚至贴壁的比悬浮的流式好很多，所以尽量吹打下来这部分细胞。悬浮细胞并不是完全不贴壁的，NK、CIK在培养中也会部分贴壁，如果贴壁严重你可以换培养瓶，常规的瓶子都是处理过的，细胞本身容易贴。

shy-shen

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. _. H6 A& y( J
好的  谢谢

地球外世界

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$ ?) K! A( B& z2 i5 G0 @采用未经表面处理的瓶子培养，起初有贴壁，后面会渐渐飘起来。为什么培养14d的细胞反而会聚团贴壁生长呢？

地球外世界

回复 shy-shen 的帖子$ B9 q0 V/ [8 L9 g/ c
7 T( r4 s' ?( k1 C" C  @
检测NK的指标是哪个？是CD3-CD16+CD56+，还是只看CD16+CD56+？想问问是怎么检测的（想问流式同型和抗体的使用）？

shy-shen

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  C8 U$ q0 v/ f. O' O& E
7 v4 V: N$ p/ J; y" `, T; g. p大部分的检测指标是CD3-CD56+,有3种亚群的分类方式，一种是根据表面标志分为CD56bright
8 Y. A  U( q1 ?, q( ?6 x1 Fh和CD56dim 检测指标分别是CD3-CD56+CD16-和CD3-CD56-CD16+，根据分泌因子区分处于研究阶段，根据粘附功能分为ANK和NANK，检测指标分别是CD3-CD56dimCD16+和CD56dim、CD16+、CD56-、CD16-

地球外世界

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" K$ a# j$ Z% C. o* ~" L) J9 ~这些每个检测的结果是百分比相加后算总和吗？

shy-shen

回复 地球外世界 的帖子4 x6 n! G+ f, L2 [8 A0 W2 E6 _% D* i

8 w* X2 Z0 o/ i  o你通过流式检测，只要看双染的百分比就好了， 如果你想要知道细致的亚群的话就看三染的百分比