胰酶消化后传代的人MSC常有大量死亡，怎么办？

BOY555

我的经验：5 k$ V. g- u& E, E* Q8 D
1.传代时间：和楼上众人一样，不能长的太满才消化，最好是90％时。
5 U4 h: |* Z( C1 Z( Q2.消化时间：因为你是24孔板，不易直接观察，镜下观察最好，且不能像培养瓶可以倒置，所以细胞开始回缩时有部分变圆时就回超净台加含血清的培养基终止反应，然后在孵箱中孵育2分钟。
8 |' |, q& g+ R# P5 X) j3.胰酶：我们原来用0.25％胰酶－0.02％EDTA，发现消化过快，时间不易掌握，现在都改用0.125％胰酶－0.02％EDTA。24孔板每孔加0.5ml为佳。另新配制的胰酶消化较快，需要注意，以免动作太慢丢失细胞。" H# g* ]1 \$ P9 d
4.吹打：加入完全培养基后吹打也很关键，吹打力度一定要轻柔，时间也不易过长，且不能产生气泡。大概加入1ml培养基（1传2时）。使用移液管吹打时注意不要将移液管内液体排空，且管头不要离开液面，这样就不会产生气泡了。
' S! f8 m% G, j" n5.另24孔板传代一般也是传致24孔板中为多，细胞在塑料制品中较易贴壁，所以一般无需加入其它物质促进其贴壁。但如果你用的是旧24孔板重复利用的话，担心贴壁不好可以先用0.1％明胶处理（每孔加入抽虑无菌的0.1％明胶盖满孔底，常温2－3小时后吸去多余明胶后，晾干并用无菌生理盐水冲洗一遍即可）。

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简单言之：( T3 G. ~' r5 Y% S- k0 x
　　　　消化时间不能过长，吹打不要过于猛烈，温度是一关键因素，加量　　　　有关消化时间，生长不要过于集中（融合过多），代次也是影响因　　　　素，酶的浓度随时间改变，新酶效果肯定突出，ＥＤＴＡ催化迅速