造血干细胞的培养

BOY555

造血干细胞的培养
0 V) c+ j. g" r2 S' G- \$ Y1 I& d造血干细胞的扩增在过去相当长一段时间是个难题,原因如下:
6 e2 C; F8 a' Z2 i5 |& T3 r1.造血干细胞向血液细胞分化的趋势很强,在培养过程中无法抑制这种趋势
0 X4 `4 Q6 G; G  c2.目前大多用cd34作造血干细胞的分离标志,而这个显然扩大了造血干细胞的范围,以至于血液各系祖细胞也包含在内,造成一定的观测难度/ [4 n& w8 c% D
3.过去用血清培养干细胞,不同批次的血清成分不一样,根本无法制定统一的扩增方法
  t& H' Z2 g+ R$ [8 C$ q5 z% h4 N但是,目前这已经不在是难题,原因如下:
3 |7 i; e+ i' H$ F1.抑制造血干细胞分化并促进增殖的无血清培养基商品问世,如加拿大STEMCELL公司的STEMSPAN系列的产品,可以在5周内使细胞数扩镇130~500倍
( m6 I9 m' V- u2.新的生化标志CD133配合CD34使分离的细胞范围更加接近造血干细胞(CD133在晚期血液祖细胞根本不表达)& V2 d# y. g$ u; r2 \0 l3 J1 l1 Y
总而言之,体外培养及诱导分化造血干细胞的技术条件已具备,对造血干细胞的研究将大踏步前进。

lyj-0017

1# BOY555 * U! f- p8 N' P6 M9 ~

$ B1 U6 \  L7 V% @仁兄有无相关的文献可以分享一下呢？现在正需要这些东东呀

zxslwzyh

详细点啊

德德亦菲

同问，相关文献报道能否提供，谢谢

huangxin

我们做小鼠的造血干细胞很少用CD34标记，常用LSK细胞群就算是“干性”很好的HSC了。我用的培养基就是stemcell公司的SFEM，加细胞因子，但是扩增效果很一般，除非用纯度较低的Lin-细胞可以看到明显的增殖，扩增后的大部分是祖细胞之类的。对真正的HSC该怎样扩增？困惑中

tianangelt

回复 5# huangxin
& I1 [+ ?& f, T: o( K- B; V3 R0 V8 p. r. q6 p/ w

  Q5 k8 z( ~# y3 x6 h5 j. `    我现在做的是脐血造血干细胞，培养的时候用的是IMDM培养基加细胞因子，增殖效果不是很明显，而且细胞是贴壁长的，不知道楼主说的无血清的培养基是不是真的有那么神奇。造血干细胞方面的文献真的是太少了，大家有没有可以分享的文献啊。还有，大家有没有做干细胞信号通路方面的经验呀？现在想做，很困惑，想知道一些检测指标。

huangxin

回复 6# tianangelt 2 y. o- j6 o/ C3 }

7 _- Y5 E0 u" w7 O; }$ }! I# ^0 `- T$ M
    IMDM我也用过，IMDM+20%BIT9500就等于SFEM。做过比较，还是稍微差一点。

huangxin

回复 6# tianangelt , J/ j- I% w+ r. D! I4 U* t+ Y

: W( S; [5 Z1 z8 `0 {! \0 t8 t  h8 T: n
    不知道你说的干细胞信号通路是哪方面的，我是做DNA损伤和衰老相关的，通过shRNA把目的基因转到造血干细胞中，体外就是观察单克隆形成能力，增殖能力，主要是做体内，通过骨髓移植观察长期的效果。开始走了很多弯路，现在好点了。

tianangelt

回复 8# huangxin
6 |/ E6 O- Q. p9 p; |: ?5 C# V8 z* C- ]  _" J
$ s+ z+ ^: d' u3 b/ ~" F
    我想做的是造血干细胞维持未分化状态的机制研究，看看一些细胞因子是通过什么方式使造血干细胞不发生分化而维持自我更新的。

德德亦菲

我们目前用的是1640培养基培养脐血干细胞，加了血清和诱导因子。