大鼠全骨髓培养法为何看不到细胞贴壁??培养液也不见混浊和变色

bimuyu

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% L5 U6 F2 x  n, L我养的是wistar大鼠的骨髓干细胞,现在做了好多批,总也不见细胞贴壁,心情恶郁闷,我用的是dmem和f12加15%血清,开始怀疑血清不好,后来换了两种了,还是一个样子,我的细胞接种后看细胞活性是挺好的,但就是不贴壁(养三天不换液也不贴壁),培养液也不见混浊和变色,请高手帮我想想办法吧!

bimuyu

可以用涂胶的培养瓶增加细胞的贴壁率

bimuyu

我养了小鼠的，接种后24小时就有贴壁了，我用的α－MEM培养基和20％小牛血清

bimuyu

i am also culturing mouse mesenchymal stem cell but i am feelling frustrated for they don't grow well after passage 0

bimuyu

我也在养大鼠的MSC方法与你一样,24小时后就贴壁了,我用的是一次性的塑料培养瓶,但细胞形态不好,传代后状态越来越差,我想请教各位是不是大鼠的不好养啊

bimuyu

我在做wistar大鼠的骨髓干细胞，用的是α－MEM培养基和20％小牛血清（Hyclone）24小时贴壁,一次性的塑料培养瓶（Hyclone）,原代培养时采用直接贴壁法，效果不错，5*105密度接种。以后随着换液可以去除非贴壁细胞而达到纯化的目的。

bimuyu

个人认为:1)血清问题不大.如袋装现配请考虑ph值.1 m+ q, v, [* E1 H$ |: ?' w
2)动物多大,一般动物越小,细胞活力越好.$ [  n9 c4 x3 r9 T5 b/ \
3)取材过程顺利吗?考虑血凝的问题了吗?
" ]' u. z, p! `- p4)培养瓶问题.建议用带滤膜的塑料瓶即可.
/ k: @* V9 Y2 x. J5)全骨髓培养法一般显的培养液较浑浊,只是无细菌污染.你所说培养液也不见混浊和变色,我认为是离心后培养,就应考率离心的问题了.
8 A5 |) m, ?* Z0 G6)初次加培养液过多.建议薄薄一层即可.3 i. {4 a! F4 \& G* _7 c# I: }, g" `1 t
7)处次移入杂细胞过多,占据贴壁空间.建议每天观察时加以摇晃.
; k; _% e; J: e1 Y" u7 W3 r8)孵育箱的问题,可能性近乎零.
; k/ W- q7 z+ I- S, D- |9)建议处次换液采取半量.
! R) i9 \" }5 {8 G8 }' c4 J10)观察用显微镜的使用问题.
! h6 u* Z/ j- J, C4 D11)吸取细胞时试管过火后的温度是否过高.
9 E. [5 X5 T5 [* b/ Q# g大鼠全骨髓培养法我作过很多次,都比较成功.此实验要求细心和耐心.
: e& x) t! |. U& y祝你好运

bimuyu

每天摇晃不妥吧？！严重影响贴壁！！！
) E1 @4 @8 o4 u; Q# h# f. D5 }0 X! U( ?4 y
正确的做法是：
4 q' t1 p9 M3 G* v, x5 u8 S接种时密度低一些，放置培养箱完全静止两天，然后PBS轻轻冲洗，换液，. u- [9 }$ ~! _
OK，你就可以看到MSCs了！！！
# s, }/ x7 P9 z. T& U6 O我先后用全血法和Percoll分离法养过大鼠 小鼠 兔子 绵羊 成人 人胎儿MSCs，都比较成功。  R2 P- V' {+ F$ i  q

: p9 g( f8 L! A0 b0 R祝顺利！

bimuyu

请问全血法和Percoll分离法养的兔子 MSCs有什么区别吗，生长特性有不同吗

bimuyu

接种细胞后不要总看，要有耐心，我们实验室培养人的MSC就是三天 才看一次，开始也是灰心失望，但在一周后奇迹终于出现了。所以强烈建议多放置一段时间。祝实验顺利！