请教诸位小鼠MSCs的培养，为何长的如此慢？

smlyk

小鼠骨髓间充质干细胞（MMC）看似简单，实际窍门不少，我从1996年起开始培养小鼠MMC，现谈谈自己的体会如下：
& x" w4 z# P8 i) f$ S1) MMC只所以叫间充质干细胞，其实其本身就又一些干细胞的特征，如向多种细胞如成骨细胞分化的能力，因此一些饲养干细胞的经验必需借鉴。所以首先要保证其较好的增殖能力而不被迅速分化为终末细胞（其中最容易出现破骨细胞），才能使其快速生长，我们的经验是：用较小周龄的Balb/c小鼠（一般用4~6周）、迅速冲出骨髓（避免长时间操作）、另外初种的细胞密度适度（一般为106)还有就是一定不要将血清浓度用得太大（不超过15%），避免细胞分化，当然最好用胎牛血清；当然第一次换液也很关键，千万不可性急，一定要等基质细胞已伸出突起，在培养瓶底铺开并有小集簇状细胞时再彻底换液，换液过早，细胞容易损失并容易分化。一般注意了上述问题我们一般10~14天可养满一瓶基质细胞，并可传代3~5代。
  i  f* _) i& J! J! P2)关于传代时不容易消化问题：MMC的确是一种很难消化得细胞，因此消化液得选择和质量非常关键。我们常用得是0.25％胰酶,另外再加入0.02％EDTA使细胞迅速消化下来，如果超过10分钟细胞仍消化不下来，细胞一般会死亡我们控制此步骤主要有三点：a)用国产低黏附得玻璃瓶养MMC b)用进口得质量较好得胰蛋白酶（一般用SIGMA),避免一次大量配制，最好分装、储存于－20oc，避免反复冻融。 c) 细胞融合成片，长满瓶后再消化！
" [8 K* @- t9 d, }$ m. F7 A我想，上面得楼主如果注意了这些问题，肯定能将小鼠MMC培养好