求助免疫组化双染方法

baichunyu

我要做个细胞的双染鉴定，但是没有做过，在网上搜了搜，也没有好的方法！求助各位给点建议！

痞子的烟头

其实跟单染基本上相同，只是封闭的时候注意血清就行了；

baichunyu

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+ _# T) `9 T" C! H$ e& k3 `: [9 `有没有具体的步骤供参考？谢了

mscbj

有双染的免疫组化试剂盒卖市面上！

aspen

从原理和实验步骤上，双染看起来是挺容易的，不过如果实验室以前没有一定的病理技术基础，要染得好还是比较困难的，可能要摸索很长时间。, F/ d% _- M$ {! H) X. W1 r
有可能的话，楼主也可以试试免疫荧光法。在某些情况下，此种方法更为容易，作出来结果更为好看。

baichunyu

5# aspen 2 Q5 h( V4 p0 \

/ Q" ?" ^) H! O, [% g& f5 i" x谢谢

freeair

回复 2# 痞子的烟头 5 w8 W7 ~4 j' z2 P: ]+ h4 H

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    请问一下，你所谓的“注意血清”是指什么啊

wzx6660

双染要注意最后的显色，比如一个用DAB显色，另一个就不能用DAB了，可以用BCIP(举例，有人用)，当然三抗也会随之改变。用荧光抗体方便，但是观察要用荧光显微镜，另外也要注意荧光有半衰期，观察要快，避光。

sxjcsq2010

哎哟，师兄啊！

luch

双染色其实二抗用不同的酶标记也可，比如一个用辣根过氧化物酶，另一个用碱性磷酸梅标记，还有就是二抗的选择，因为大多数二抗虽然写了是抗某种动物的IgG，但是也会与其它物种的IgG产生交叉反应，这时候需要使用选择与特殊的二抗，一般这种抗体价格较高，而且国内产的有时候写了与某某物种不会发生反应，但实际上还是会反应，一般国外的公司如jackson lab, pierce等都有的。
0 b. G4 u0 T1 C. l所以说其实双染色不是很好做，除了上面的问题还有很多其它问题，荧光染色可以避免部分问题。