提SD大鼠的MSC的两个相关问题，请教大家

zlz2626

我是绝对的新手 刚进实验室不到半个月我昨天第一次提SD大鼠的MSC     可用PERCOLL混合离心后中间的第二层很薄也就1mm吧，（因为以前也没看过别人做，而且我所在的实验室也没人做这个，所以还不敢确定那层是不是我想要的细胞,  但我还是把这层吸出来  接种到培养皿里了，  但是心里很没底，昨晚9点多从实验室里出来一直在想，有几个疑问  希望能得到大家的帮助。
& `, Y  B5 P' G  y! {1  我用的percoll是1.075的 我取了2只大鼠的股骨、胫骨、肱骨（6--8周的） 为什么第二层那么薄呢？是不是取材太少了？一般都用几只啊？
( D( ?3 n6 P5 |6 n$ e; N+ _& }2 S) O2  在用就是纯化的问题，我接种的会不会长的不是MSC  除了MSC   还会有其他的什么细胞吗？3 V! Z) T) H- |  }2 p9 v
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谢谢啊

sajia

1# zlz2626
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顶一下~

饶冠华

一点菜鸟经验：$ ]% f& P, x1 D7 ?2 z: S* g) j. Y
我养过几次，经验不多。 个人认为初次培养msc没有必要梯度离心，全血培养效果更好些，就是直接把从骨髓冲洗下来细胞过筛，然后接种培养就可以了。等传过几代之后细胞就比较纯了。
  F; V7 V" e, z, |+ \2 b' r.....
4 ?# m2 t4 L* S0 C* U% \等待高手解答...

笑可依

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1、你取了2只接种到多大的瓶子？全骨髓培养法，1只就够了。你用的密度梯度离心，2只也是可以的呀。分离的第二层就是很薄，因为把杂质细胞都去除了的。" o% p0 E9 p2 ^8 m" b5 v5 j
2、你接种的大部分是MSC，通过传代而逐步纯化。% O4 L4 f- t6 a$ ?- p
3、另外同意楼上的观点，SD大鼠的MSC很好养，全骨髓培养法就可以。就是把胫骨和腓骨的骨髓冲出，直接接种就OK，一样可以的。
+ ]- ]% N* \  s祝实验顺利。

以马内利

谢谢 各位的帮助

zlz2626

谢谢版主们的帮助  。我还有些疑问：  我培养MSC是想做稳转  之后筛出稳定的表达株，之后把我的表达株向软骨方向诱导分化  还要做二维及三维培养  最后是动物实验    6 G) e6 ^/ T. g0 l. O7 `, f
  查了些文献都说MSC传几代之后生长状态就不好了，用全骨髓培养法  得到的细胞能抗得住这么折腾吗？  做实验真不容易啊 总有种提心吊胆的感觉

zlz2626

对了  我用的是33mm  培养皿    我们实验室其他几个样原代的同学说培养皿长的好 我现在也是在摸索。

zlz2626

今天过来看看，我第一次提的细胞基本没长，前天又提了一次  换了60的培养皿  感觉状态比第一次提的时候要好，   想请教一下各位战友我分离时用的percoll是1.077的  就是体积分数60%的  我是这么配的：一份PBS 加九份PERCOLL 原液  配成100%的   之后再按体积分数稀释到60%.  这么配的浓度没问题吧？

zlz2626

今天换了液，还是没有看到明显的贴壁细胞，总感觉梯度离心提取的哪歩有点问题 ，但又不知道是哪出了问题，  再养两天看看吧  同时也请高手们点拨一二啊！！！先拜谢了

zlz2626

今天 看到有贴壁的细胞了  不过圆形的多  是不是一开始还没有变形啊？？？查阅了文献 说5到7天 的时候 可能会有明显的变化，这么看我的第二次 比第一 次还是有进步的   给自己加油了  呵呵   同时也希望有经验的战友能够指点下！！