西京医院首次建立神经干细胞移植实验模型

韩雪娜

日期: 2006-09-23 今日/总浏览: 2/1351) j$ P4 d2 P3 s" c5 i' `+ I
, v$ N8 X8 b9 a1 \

1 T8 h& q- o, L( A# u9 ]. {& \" ?, y: A

* I' ^9 X  T6 l+ P4 X: u% _% F近日，第四军医大学西京医院全军神经外科研究所林绿标等人，在国内首次成功建立神经干细胞移植治疗脑缺血的实验模型，并观察到移植后小鼠神经干细胞在猫全脑缺血模型中能够存活、迁移并分化。
0 P: v2 u# \  O& E神经干细胞移植是中枢神经系统损伤修复治疗的新希望。近年来，国内外有关神经干细胞移植治疗脑缺血的研究很多，但由于体内微环境的复杂性，在体研究十分困难，进一步的人体试验更加困难。因此，建立一个方便有效的动物模型十分必要。
. s: V- R) z5 t7 C- n' [% N$ o为建立一个方便有效的动物实验模型以研究神经干细胞移植治疗脑缺血的可行性，林绿标等人将健康家猫12只，随机分为缺血再灌注组10只和假手术组两只，参照四血管阻塞法制作猫全脑缺血模型。先用显微手术的方法分离家猫双侧椎动脉并电凝，永久性闭塞侧椎动脉。24小时后再分离双侧颈总动脉，用动脉夹阻断血流。用含表皮生长因子的无血清培养基原代分离培养小鼠神经干细胞。将原代培养的小鼠神经干细胞移植到全脑缺血再灌注损伤模型的一侧大脑皮层中，假手术组猫大脑皮层注射同量的磷酸盐缓冲溶液。用免疫荧光技术检测移植1个月后的小鼠神经干细胞。
0 z4 E8 g4 ^1 r2 V! l, L结果显示，缺血再灌注组10只家猫经缺血再灌注损伤后死亡两只，1只夹闭血管后始终未出现静息脑电波，模型制作成功7只，成功率70%。假手术组家猫全部存活。缺血再灌注损伤后的家猫均出现不同程度的肢体瘫痪及平衡失调表现。饲养1周后，肢体瘫痪及平衡失调表现均逐渐有所改善；原代培养细胞在无血清培养基中生长2~3天后，大部分细胞死亡，只有少数以单细胞形式悬浮生长。部分细胞分裂形成几个到几十个细胞的细胞团，到7~10天时可生长成有数十个~数百个细胞的细胞团，也呈悬浮生长。这些悬浮生长的细胞在含血清培养基中能够贴壁生长，并部分分化成神经微丝抗原阳性的神经元及胶质纤维酸性蛋白抗原阳性的神经胶质细胞；细胞移植后，家猫症状有所改善，但移植侧与对侧肢体瘫痪及平衡失调表现改善无明显差别；免疫荧光方法检测小鼠神经干细胞移植到猫前脑后1个月仍有大量存活，部分细胞分化为神经元及神经胶质细胞，部分细胞向猫脑组织中迁移。迁移深度0.1~0.2毫米，呈弥散性分布。沿针道侧壁贴附的细胞呈圆形，迁移到脑组织深部的细胞大多呈梭形，海马及对侧脑皮层等远隔部位未检测到阳性细胞存在。不同个体间未发现明显差异；缺血再灌注组脑皮层及海马CA1区苏木精-伊红染色示典型的迟发性神经元坏死。- R7 P9 ?! o/ A. z% a' |! e4 f0 q
据林绿标介绍，实验还观察到神经干细胞在体内分化细胞中，胶质细胞明显比神经元多，由于未行免疫双标检测，还不能得出神经元与神经胶质细胞的相对比例，故进一步的实验须在改变某种诱导因素的情况下，用免疫双标检测的方法观察神经元与神经胶质细胞比例的变化，以期达到体内定向分化的目的。( n) c& n3 I4 m1 t" v0 j

% `$ k1 W$ g% T5 ?1 a7 b* a
. F) ?* N9 @8 J% C8 @6 y5 a) v. }6 g
% d; _/ `0 i& k0 p& g
( }- _; s" ^3 I0 q% A/ X/ [$ q
作者: % S. \  K/ a6 R* h2 b
来源: 中国医药报
- t9 J0 ^8 V. n4 x- H发布者: 亦云