为什么我制备的免疫细胞里面DC的比例这么低？

cellprobe

我把PBMC贴壁两个小时，然后吸走上清，用培养基洗细胞两次，然后诱导DC。5 R9 t# T3 n: \# g
8天以后，只有18%的细胞是DC细胞，为什么比例这么低啊？
: N5 Y' y% W& p4 i- i$ |但是这18%的细胞里面几乎都是成熟细胞。

JULY0723

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* X. T( [! {3 s: d2 e2 I. B& M7 B5 P% ^) B
请问你们是如何测定dc细胞的含量的？用的流式细胞仪吗？
! v' a2 z/ }+ ]! _. C9 C6 o# hdc和cik的比例是按照几比几混合的呢？

wangyi111

你流式检测那几个指标？

yanxm920

一般临床上做DC时，至少贴壁4小时以上，下午分的PBMC可以过夜，再将未贴壁的细胞转移走，清洗一次，加入含GM-CSF和IL-4的培养基，细胞的数量会增加一些，DC的比例也会高一些。

lyj-0017

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* ?2 f" I4 [) ]1 T" o3 \) ]/ d: A' O- l+ ]0 Y( n
方法上没啥问题。需要考虑的有1、细胞因子活性是否没问题；2、流式抗体选择是否正确；3、流式检测的gate是否正确；

cellprobe

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6 L$ a2 X# j: h# \
" S- A0 H2 P4 V7 _5 R* t) |- X我把PBMC贴壁两个小时，吸走上清。用培养基洗细胞两次。1000U/ml GM-CSF+ 500 U/ml IL-4五天, 500U/ml TNF-a三天。而且第八天收细胞的时候，把没有贴壁的细胞也消化下来了。可能是操作的时候混入的杂细胞太多；还有贴壁的细胞可能是单核细胞或者未成熟的DC。

lyj-0017

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. L+ L1 l4 H9 P7 _3 m* p( `4 }2 `! s' J6 S
简单说一下PBMC多少，大概的制备流程是怎么样的，只是这样说，没法分析