一个诱导iPS时候的问题：关于c-Myc的转化量

亿云

不知道各位在做iPS时候用的是什么样的质粒。目前我用的是自己合成的将yamanaka四因子整合在一个lentivirus病毒中的vector，其中在c-Myc之前有一个元件可以导致c-Myc的表达量降低到5~20%。不过目前试过两批，一直没有很好的结果出来。3 n$ o+ f: s9 {" B: M1 ]$ d2 A
不知道各位都是用什么样的vector，尤其是一些做除了人类，鼠类，恒河猴以外的物种的朋友们？目前一段时间大家一直在讨论关于p53的文章，其实说白了就是iPS的最基本的要求就是要超速生长，获得immortality，所以是不是如果对c-Myc的量进行控制的话，会影响iPS的诱导效率呢？& A! {+ V1 Q) u5 E! f( X
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P.S：附带两个问题：
1 I; Z! V: s7 j+ c1、有人试过使用p53的抑制剂来提高iPS的转化效率么？
, I; b1 z* c% |6 _* y2、大家可否描述一下各自使用的MEF的要求？1
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亿云

1  如何确定c-myc的下降是由串联元件中的前一个元件引起的呢？* m' ~5 z* k; ~8 q

* k, g7 L3 m0 j9 j" s+ p; w; X2  c-myc的下降是在什么时候检测到的？
  w$ }/ }6 H/ r5 V: r% v% m" f, U2 R+ T0 x% |$ F- K" R6 D1 i
3  “目前一段时间大家一直在讨论关于p53的文章，其实说白了就是iPS的最基本的要求就是要超速生长”=如此简单，为何发了这么多文章？& g# L& g. P8 n. X5 X

2 Q8 I8 X$ K0 z9 w1 f4  “有人试过使用p53的抑制剂来提高iPS的转化效率么？”查查Dr.邓第一篇关于p53抑制的文章出现多久了？“Revised?”，你的明白？
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' {1 F# V) |* z" k& G- l4 p5  “大家可否描述一下各自使用的MEF的要求？”= 照着Yamanaka做吧。

亿云

P53的抑制剂很多 但是估计.....hhe，像Landrover已经说的很明白了，你可以去试，呵呵，目前我也在试，但是本人始终认为如果为了提高效率一个较优方法还是对Somatic cell type的选择。
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关于MEF选择，本人也曾经提出过这样的问题，但是确定的是SNL比MEF效率要高些，具体原因尚不明确，但是有人做出来的data的确是这样的。还是建议使用original的东西，除非你有人来源的MEF或许更好，我曾找过这样的细胞系，虽然作者答应给细胞系，不过要我们发文章时把他也署名，被我们谢绝了。还是乖乖用SNL好了，呵。