一个诱导iPS时候的问题：关于c-Myc的转化量

亿云

不知道各位在做iPS时候用的是什么样的质粒。目前我用的是自己合成的将yamanaka四因子整合在一个lentivirus病毒中的vector，其中在c-Myc之前有一个元件可以导致c-Myc的表达量降低到5~20%。不过目前试过两批，一直没有很好的结果出来。' ?7 ?$ h; n1 w7 P
不知道各位都是用什么样的vector，尤其是一些做除了人类，鼠类，恒河猴以外的物种的朋友们？目前一段时间大家一直在讨论关于p53的文章，其实说白了就是iPS的最基本的要求就是要超速生长，获得immortality，所以是不是如果对c-Myc的量进行控制的话，会影响iPS的诱导效率呢？3 O9 q- p7 I5 a6 @9 S: M
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P.S：附带两个问题：
# F$ H" F( x$ X6 I6 [1、有人试过使用p53的抑制剂来提高iPS的转化效率么？
2 M: x- W  P' E2、大家可否描述一下各自使用的MEF的要求？13 n1 ~- l7 J1 K, g! {. r1 j3 F9 m/ K

3 F9 V4 v9 l6 ]7 `  R8 ?本贴及回复 转贴自干细胞论坛

亿云

1  如何确定c-myc的下降是由串联元件中的前一个元件引起的呢？1 b+ g7 h3 \3 N# f8 T

& }- t: ^) A  J: Y7 ]7 o2  c-myc的下降是在什么时候检测到的？
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2 p. d  J$ C2 I3  “目前一段时间大家一直在讨论关于p53的文章，其实说白了就是iPS的最基本的要求就是要超速生长”=如此简单，为何发了这么多文章？
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4  “有人试过使用p53的抑制剂来提高iPS的转化效率么？”查查Dr.邓第一篇关于p53抑制的文章出现多久了？“Revised?”，你的明白？
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5  “大家可否描述一下各自使用的MEF的要求？”= 照着Yamanaka做吧。

亿云

P53的抑制剂很多 但是估计.....hhe，像Landrover已经说的很明白了，你可以去试，呵呵，目前我也在试，但是本人始终认为如果为了提高效率一个较优方法还是对Somatic cell type的选择。
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; t3 h+ T" f; i关于MEF选择，本人也曾经提出过这样的问题，但是确定的是SNL比MEF效率要高些，具体原因尚不明确，但是有人做出来的data的确是这样的。还是建议使用original的东西，除非你有人来源的MEF或许更好，我曾找过这样的细胞系，虽然作者答应给细胞系，不过要我们发文章时把他也署名，被我们谢绝了。还是乖乖用SNL好了，呵。