一个诱导iPS时候的问题：关于c-Myc的转化量

亿云

不知道各位在做iPS时候用的是什么样的质粒。目前我用的是自己合成的将yamanaka四因子整合在一个lentivirus病毒中的vector，其中在c-Myc之前有一个元件可以导致c-Myc的表达量降低到5~20%。不过目前试过两批，一直没有很好的结果出来。" L- Y: ]1 Q0 ?: `  g4 ~/ `
不知道各位都是用什么样的vector，尤其是一些做除了人类，鼠类，恒河猴以外的物种的朋友们？目前一段时间大家一直在讨论关于p53的文章，其实说白了就是iPS的最基本的要求就是要超速生长，获得immortality，所以是不是如果对c-Myc的量进行控制的话，会影响iPS的诱导效率呢？
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( T; z  k0 O4 |; O4 Z9 i. KP.S：附带两个问题：8 `4 u: T  P* ^5 i' G. I7 d
1、有人试过使用p53的抑制剂来提高iPS的转化效率么？% k  E/ X# z3 C4 Q" q1 O0 Q5 f, u
2、大家可否描述一下各自使用的MEF的要求？1
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亿云

1  如何确定c-myc的下降是由串联元件中的前一个元件引起的呢？- j5 F+ s  {5 Z8 l1 H7 D

( L- d9 Q& w5 ^2  c-myc的下降是在什么时候检测到的？: o9 t4 c4 r4 u: J+ E8 J

: j1 D/ s! y# d2 ]: q3  “目前一段时间大家一直在讨论关于p53的文章，其实说白了就是iPS的最基本的要求就是要超速生长”=如此简单，为何发了这么多文章？
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4  “有人试过使用p53的抑制剂来提高iPS的转化效率么？”查查Dr.邓第一篇关于p53抑制的文章出现多久了？“Revised?”，你的明白？
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5  “大家可否描述一下各自使用的MEF的要求？”= 照着Yamanaka做吧。

亿云

P53的抑制剂很多 但是估计.....hhe，像Landrover已经说的很明白了，你可以去试，呵呵，目前我也在试，但是本人始终认为如果为了提高效率一个较优方法还是对Somatic cell type的选择。( n& v, |: V5 d" H. o$ \

5 y& y0 s- s' E6 ]5 p) v关于MEF选择，本人也曾经提出过这样的问题，但是确定的是SNL比MEF效率要高些，具体原因尚不明确，但是有人做出来的data的确是这样的。还是建议使用original的东西，除非你有人来源的MEF或许更好，我曾找过这样的细胞系，虽然作者答应给细胞系，不过要我们发文章时把他也署名，被我们谢绝了。还是乖乖用SNL好了，呵。