求助-怎么养MEF细胞

Te.L

我最近在养MEF细胞，但老是养不好，传了3代左右不仅长得慢，而且形态也不好。
/ ^4 C5 x* o' L3 z/ O- ^我用的皿和瓶是greiner的；DMEM高糖培养基+10%进口FBS+双抗。
( `* d( l9 M' t# v& W" b传代是用0.05% Trypsin-EDTA，大概消化3-4min。7 G: C5 t* l% l& G0 Z; B
现在很是郁闷！急需各位的指点。MEF细胞难养吗？: U' g! }4 }& A9 D
谢谢！

mominglily

我个人认为很可能是消化时间过长了，一般消化1~2分钟就行了，消化久了细胞容易死。因为胰酶对细胞来说也是一种损伤！

cony

我现在也在养MEF，准备用于ES。MEF的确很好养，我的配方跟你的一样，但是养ES的话只能用四代MEF以内，养了一段时间后，觉得接种的密度对MEF的活力有很大影响，密度低，细胞间隔宽的话，很容易老化，细胞间隔短，它就反而长得好，长得快。这是我自己的经验，不知你合不合适。

polato

养STEM CELL可不能够像养cancer cell那样( E0 X5 |( @( L* E
这个MEF是有它的专门培养基的
1 e) Z2 M" _8 e: G3 dhttp://www.cyagen.com.cn/productslistB.asp?pid=34&id=47

zhbshi998

我养的细胞最开始还感觉蛮好的，不过后来由于血清用完了，就换成了小牛血清，还把浓度调大15%-20%，结果还是不行，细胞即使能长，但是感觉形态发生了变化，看来还是要好的胎牛血清才行啊

上海过客

20MIN 留下的细胞好少 ，可能本来MEF就少

上海过客

今天我做MEF 原代的时候 20MIN 就换液，明天看结果 怎么样

细胞海洋

回复 16# jinyiran 2 D. [/ j, s- y+ o# L5 W; X
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6 b; A. S6 W$ \' u9 {5 Vhttp://www.stemcell8.cn/viewthre ... D%CC%E5%CE%DB%C8%BE
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都是关于支原体污染的解答，你看看对你是否有帮助

jinyiran

回复 15# yunxinxu
" c/ T# I; X9 p; r' d* G6 D1 D; U  `, Z0 R( {9 A8 ]$ ?) J
关于支原体污染问题，如何进行检测？？
# t1 j% H4 o9 V4 r5 d9 W+ E& ]% L支原体污染肉眼无法观察，细胞呈现如何的状态有可能是因为支原体污染

yunxinxu

本人感觉跟消化时间关系不大，因为成纤维细胞在原代培养的时候，用0.25%胰酶消化半小时都没问题。更不用说操作问题了。我认为更有可能是培养基的问题，要么就是支原体污染了。很愿意与发帖之人交流。qq:117379199