【求助】请大家帮我看看这张照片是否IPS克隆？

yaoyaoyatou

我是用慢病毒诱导HDF10天左右形成克隆，可是总感觉和文献上的克隆图片不大一样，而且克隆养了半个多月一点变化也没有。这张照片是形成克隆后大约1个月的时间照的。请有经验的前辈看看这样的形态是否是IPS克隆？我做了SSEA-3染色，荧光不是很强
2 S) i" N/ F. |# Z" x' g。

gemstone

好像不是克隆！如果是克隆的话，随着时间延长会有一些变化，而从你的照片看克隆发黑。

痞子的烟头

2# gemstone
) m5 k* V, f2 e/ ?* D* s
# K9 s, u" q$ s如果单单从图片上看起来不是，但你所依据的是你检测的结果；

大猪小猪落玉盘

可能是准备细胞的时候团块没有吹散形成。再加上死细胞什么的。不是阳性克隆。

yaoyaoyatou

应该不是细胞团块，在我转导一周左右的时候开始出现。下面这张图片是我刚发现克隆时的照片，我用四型胶原酶处理克隆没有反应，后来消化SPLIT到六孔板后就开始出现第一张照片的这种形状的克隆。而且逐渐增多。做了3，4次都是这样， 我不知道该如何接下来实验。大家给点意见吧！

yaoyaoyatou

偶也很奇怪为什么克隆会发黑，怀疑是死细胞团块，但是如果是死细胞团块时间长会漂浮，它贴壁特别劳，并且我做SSEA-3时看到了荧光，只是不是很强的荧光。难道组织本身也会自发荧光吗？

cortex

细胞过于密集（过厚），是会发微弱的荧光的，尤其是红色时。看起来你中间的发黑的细胞应该是死细胞。一周左右的时候还是比较正常的，一个月左右的细胞确实分化了。而且状态极度不好，周围都有很多象细胞碎片样的东西。

Jonathan

1# yaoyaoyatou 3 D2 l# M7 f2 s2 c- x. e
3 q1 P8 x: A0 P7 J" n& g+ q
从图片看，不是ips克隆。SSEA-3染色弱阳性，只能说明某些细胞呈现ES marker阳性。检验人ips的指标是畸胎瘤，鼠ips的指标是嵌合鼠。

Jonathan

还有，再说一句，你照片的技术很需要改进。几个照片都是如此

gemstone

养了一个多月的那张照片是诱导原代的克隆还是经过多次传代以后的克隆？如果是病毒感染后原代出现的克隆的话，恭喜你，很可能你得到了iPS。( g+ \/ P% Q7 [0 |1 j* [" k- K
说明一下：这个团本身不是iPS或者不完全是，但是，如果你在显微镜下将这个团挑开，下面会有一层细胞，那个细胞如果经过传代就会呈集落样生长。原代传代时最好不要用酶酶消化。一个集落放在一个孔（96孔板带饲养层）。