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2003年4月1日PNAS杂志中刊登了一篇介绍乳腺癌肿瘤干细胞筛选的文章。全文见：
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' R4 I2 P1 \' n& Chttp://www.pnas.org/cgi/content/ ... ;resourcetype=HWCIT' S4 l- h0 E: N5 c ^6 C" M
& K1 O# n9 I5 c$ m1 ]8 u! Q现将对该文章的阅读笔记记录乳腺：0 I/ w) W, M0 o$ E' J* `! r6 q7 ]4 i
9 ]/ n! T- M1 X0 G（1）在实体瘤中发现，只有少部分肿瘤细胞能够在体外具有克隆形成能力：5-11- g4 U# u; U) ?' b$ F% Z1 d5 }) u1 b
. k! `( J8 |6 b s: }
只有种植大量肿瘤细胞在实验动物内，才能建立异种移植模型。有两种解释：
$ ^$ J0 }4 e: s& Y# o1，肿瘤中每一个细胞都具有增值并形成新肿瘤的能力，但单个细胞实现该能力的可能性很小；
( E* _4 N( t( f; P2，只有少部分细胞具有增值并形成新肿瘤的能力：12
( i& I0 ]1 [/ y5 G6 c2 i! ^$ N# s7 I
在造血系统肿瘤中，已经证实了以上第二种解释，并筛选出具有该特性的细胞：13-15. `; q& F6 u' J" l- D0 p8 v8 V
; X" a, s4 i2 p& W3 S& k( R* Z
( |" M1 ]; }0 h为了说明实体肿瘤的异质性，我们建立了NOD/SCID老鼠模型，在该鼠的乳房垫上可以持续培养人乳腺癌：16 S2 m( L2 z( r$ T! s! N1 @1 ]
并在此基础上筛选出少部分具有形成新肿瘤特性的细胞，并发现了该类细胞区别于其他乳腺肿瘤细胞的表明标记物。1 ^9 G! v3 V& J- ~: r! I
本文具体介绍该筛选和鉴别方法
: z! t4 h8 N1 ?1 c2 ]: I# w! A
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0 e+ r* B* y& Y3 c' |% k（2）肿瘤生成细胞的鉴别：- M. P/ a; Z3 n9 t1 l. ~
X6 m- V! O" F u1 d
通过不同抗体标记，可以去除死细胞（7AAD+),鼠细胞（H2K+)，和谱系+的正常细胞（CD2,3,10,16,18,31,64,140b）! C' q8 M: {' T0 ~, ]# ]
CD24,CD44流式细胞图显示的每个点代表一个活的人谱系-的肿瘤细胞，框中选定细胞的比例代表该标本中肿瘤形成细胞在整个标本肿瘤细胞中的比例。0 D3 F* s& @9 c1 Y3 e, w
( X, p4 w* t# q( l6 n
0 w0 C/ b0 T1 f4 z+ f（3）对于各标记抗体的解释：
3 M, b% w! B# H- a+ @CD24,CD44,B38.1是乳腺癌细胞的表面标记，CD24,CD44是粘附分子，B38.1+是乳腺、卵巢肿瘤特异性标记物：. J& l) e6 w1 L# f1 M& U' }) V
17-194 C" E, P, S& l$ B3 r2 s. {
7 D: ~3 l# {: @6 M% ]2 Z! P
通过流式细胞仪分析，发现，CD44+细胞中完全包含了B38.1+细胞。$ n u/ U% ~8 T- V. l/ L- i8 N
% O/ x. p+ I+ W6 [/ w( n9 `
, j# m8 N" t; \, [& ?
有些抗体只在正常细胞表明表达，而在肿瘤细胞表面不表达，这些抗体包括：CD2,CD3,CD10,CD16,CD18,CD31,CD64,CD140b。
' {" Y7 q3 G$ K) Z3 A) K研究发现，Lineage-肿瘤细胞始终表型为neoplastic细胞。9 Q! `' i* L' C3 z$ Y
# F5 {0 ?3 _0 D3 t1 k+ d0 {/ S' U
肿瘤或胸腔渗液中，11-35%的 Lineage-肿瘤细胞是CD44+CD24-/low。. m K) v' z, j ~
3 K/ t- e# @& t& ^- xESA过去被用于区别上皮肿瘤细胞和良性反应性间皮细胞：20
. z9 K5 v* @% f! K! D! Z1 [仅200个ESA+CD44+CD24-Lineage- 就可以在种植体内形成肿瘤，而多至2000或20000个ESA-CD44+CD24-Lineage- 细胞则不能形成肿瘤。说明前者生成肿瘤的能力是后者的50倍以上。! x8 F, ^1 [) l1 q/ W/ g
6 L$ j. j2 ?& c6 u( [
1 ]4 g7 c2 R" {: c8 h（4）figure2：
b$ N8 F) h" C# n1 K3 x1 l" T, o
& M [9 k+ i( N. E区分肿瘤形成细胞和非肿瘤形成细胞其细胞周期状态是否不同，结果显示，两者细胞周期分布相似。说明，以上两种细胞形成肿瘤的能力的差异不是由细胞周期分布不同决定的。) t, W; m2 b8 `% ?
& V) L, M0 C% a（5）figure4：
+ i' l( _% d1 n3 B5 N2 E$ w* \& l; Q2 ~4 f
该图说明，从原发肿瘤中获取的细胞，流式分析结果如图a,b；
9 v3 h3 x8 P. Gc,d图分别代表通过标记抗体，从a,b中分选出的肿瘤形成细胞；' Q) W1 A4 a1 p0 a- R. [1 h- a! W
e,f图分别代表c,d图中细胞种植后形成的新的肿瘤，其细胞流式分析的结果。, K' R* r! F. u& Y
2 B. Y0 Q- |! \
从以上图中，可以发现。肿瘤形成细胞形成的肿瘤，其包含的各表型特异的细胞于其来源的原发肿瘤中情况相似。
1 u4 Q. l/ E. D5 C$ y# J, B2 e* y" P" e3 n) n$ N- V
（6）急性髓细胞性白血病的白血病形成细胞与早期的造血祖干细胞相似：14
* i* d4 E3 e" _; \; x
- U& D0 y o% m( ]. J" \/ x我们研究结果提示，可能乳腺癌肿瘤形成细胞也如此，因为，早期的多能上皮祖细胞也可以表达ESA和CD44：26-28 |
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发表于 2009-10-23 21:42
