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DAPI标记细胞避光操作具体应该怎么做呢？ [复制链接]

seekpic

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包包
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楼主
发表于 2009-10-28 22:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
DAPI标记细胞避光操作具体应该怎么做呢？标记后要经过洗涤，消化，计数等等步骤，要完全避光操作的话感觉很难，有没有人做过？
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guojingjing

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包包
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优秀会员 金话筒

沙发
发表于 2009-10-30 08:46 |只看该作者
我们做过Hoechst的染色，也做过荧光标记抗体的染色，主要是在暗室进行，但并非完全没有光源，不然连加在哪个孔里都看不见了。主要是从暗室的窗户透过一些光，能勉强看清楚就好。加完染料或荧光抗体放在避光的盒子里孵育一定时间。我感觉荧光没有这么容易淬灭，主要是防止较长时间较强光源照射就可以。
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xuyongan2000

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藤椅
发表于 2010-1-8 20:56 |只看该作者
我想请教一下，DAPI染色最短多长时间就行了啊？谢谢
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beidaizi

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板凳
发表于 2010-1-12 12:56 |只看该作者
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我们实验室一般用5分钟。
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cortex

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金话筒 优秀会员

报纸
发表于 2010-1-13 16:56 |只看该作者
最简单的方法，就是安装一个红灯就可以了。
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decloud2009

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精华勋章 积极份子 优秀会员 博览群书 美女研究员 新闻小组成员

地板
发表于 2010-1-16 02:53 |只看该作者
其实不用这么严格,,  我们是在实验室把灯关掉..稍稍暗一点就可以了..
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tjutiger

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7楼
发表于 2010-1-27 21:45 |只看该作者
可以在显影的暗室里解决吧
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yuheng

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金话筒 优秀版主 专家

8楼
发表于 2010-2-22 10:03 |只看该作者
参考方法：在细胞移植前,将DAPI 以一定的浓度加入培养基中,与细胞共同孵育过夜,用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI , 在用酶消化后离心收集细胞, 加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。
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cl5823283

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9楼
发表于 2010-2-22 15:01 |只看该作者
不是长时间对着光源的话，荧光不会这么快淬灭的。放心操作吧
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kqyy

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10楼
发表于 2010-2-23 11:32 |只看该作者
hao dongxi
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