细胞培养问答

细胞卡也

10 悬浮性细胞应如何继代处理？( ?( N% G6 }  H" y7 F$ K- t
一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中， 稀释细胞浓度即可， 若培养液太多时， 可将培养角瓶口端稍微抬高， 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶， 加入新鲜培养基稀释至适当浓度， 重复前述步骤即可。1 a) T2 Q% G! C- u  z  F- X
11 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？
9 X  S3 A' q1 p0 k欲回收动物细胞， 其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10 分钟， 过高之转速， 将造成细胞死亡。4 x) ?  K" l* @3 l' D* c
12 细胞之接种密度为何？ 依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
5 h) E! h0 U+ ]- {. s13 细胞冷冻培养基之成份为何？
5 V: D, R, p- z! R% G; p: [% b动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能， 故不可将DMSO 直接加入细胞液中， 必须使用前先行配制完成。  i3 Y" |% s$ N! J* b
14 DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？
7 M( p$ D, {6 ?冷冻保存使用之DMSO 等级， 必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即为无菌状况， 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于4°C， 避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质， 并可减少污染之机会。若要过滤DMSO， 则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。