请教-大家都怎么计数sphere的？

饶冠华

想要计算sphere的个数 请问大家都用什么方法，怎么计算的？ 谢谢了

细胞海洋

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tunicate

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" A/ s, F3 r+ k( _; x- J
1 E9 k& O" ~: H1 g2 Q我们统计神经干细胞用的是第二种。培养在24孔板中记录sphere数量和直径……但是实验室刚开始做干细胞……有两点想请教一下。1是sphere数量和直径分别代表什么？我们虽然记录直径但最终结果只用了数量统计。看了一下似乎也有文献把直径小于某些范围的排除出计数。如果前者对应stemcell数量那后者呢？在统计时是否有参考意义？2是我们试过打散稀释种入96孔板但单细胞似乎活不了orz……不知道是操作问题还是细胞本身问题。

leisong12

看到过相关文献，个人认为有两种方式，1. 无限稀释法种细胞入96孔板，标记每孔中只有一个细胞的孔，培养若干时间后，看那些只有一个细胞的孔是否长成瘤球，统计总的成球百分比，肯定要多种几个板子的，怎么也得有100个单细胞的孔吧。2. 可以在培养的孔板下面打上细方格，倒置显微镜下直接计数，不过这种方法有两个注意方面，一要摇匀孔板，一旦开始计数尽量轻柔，别有摇乱了，二细胞球不能太多，否则数不清。可能第一种方法更为科学，但实现起来不太容易，第二种方法略为粗放，可以找几个人分别多数几次，减小误差。

amosummer

同样的细胞种植下去，观察成球的数量，应该细胞量不能太大吧。

lh_kitty

个人觉得稀释一定浓度种板后，等长出来后在显微镜下肉眼计数吧，最好是96孔板，太大孔的话计数也不方便

细胞海洋

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# z# @, `$ R2 P: D- d2 s0 y
$ m& l: F, u. W* D! v有人回复 就会靠前

深海寂寞鱼

啊？) r. e1 d$ h+ v( E5 n& O$ a
突然发现，这个帖子是一年以前的。
  {% s) J$ j: S1 k+ z: l
4 J3 R6 q* b( A为什么这个帖子会出现在这么靠前的位置？奇怪啊。

深海寂寞鱼

回复 饶冠华 的帖子. i1 [$ X, q7 m8 A4 t: ~

7 G0 L1 l4 @! u( b: z( B具体方法是这样的：
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- Z2 J0 n% Z+ K6 ]: u% s取适当数目的细胞（100或1000个）接种在96孔板或者24孔板，培养适当的时间（通常14天）。然后直接在倒置显微镜下计数。
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注：( G; b5 |; v) r. l( D9 |3 F
1. 接种的细胞数目，最好能做个预实验，估算一下。如果成球的百分比高，就按每孔100个或者200个细胞接种。如果成球的百分比很低，则可以考虑每孔1000个细胞接种。
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8 t) O( ^* W  \9 {% \2. 也曾看到有网友分享经验：为了尽可能减少成球时细胞聚集物的产生，可以将细胞接种在6孔板。但是6孔板在显微镜下计数相对比较困难，容易漏记或者重复计数。当时那个网友推荐了一个解决方法，用一张透明纸或者塑料纸，提前在上面画上细细的横线和竖线，然后将这张纸垫在6孔板下面再计数。这个方法我没有具体试过。但是理论上觉得由于聚焦的问题，当把显微镜调整到看以看清肿瘤球的焦平面时，还能看到纸上的横线和竖线吗？$ ~, L$ Z$ Z& \9 Z
* f: B" l1 l- o. _. D5 R) a2 z

sean-shawn

我们老板让我们直接在显微镜下数 多少个克隆球 用96孔板做的 种一百个细胞或者一千个细胞 2周算一代