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本帖最后由 细胞海洋 于 2010-10-20 20:35 编辑
- u: L' x5 Z# }% B8 |; D" {7 |0 u3 o3 i7 i) n
Part1试剂：
8 Y+ H, G% I# c5 BBuffer A: 50mM Tris-HCl(pH8), 0.5mM EDTA, 0.1mM DTT, 0.1%Tween20;
; n( b& s: x+ } O) a' PBuffer B: Buffer A+1M NaCl;! ^ T! G3 T. ~& M
Buffer C: Dulbecco's phosphate buffered saline(PBS)+0.1mM DTT;
0 [" b2 g) c$ n; [Buffer D: PBS+ 2M NaCl+ 0.1mM DTT;/ G" Q# [; W: a4 H( X
LB培养基，加有50μg/ml卡纳霉素和25μg/ml氯霉素。
9 V9 K% N U* G* d5 u*所有试剂在配制之后都要灭菌，但Tween20和DTT要在灭菌之后加入。
6 u5 c- j. p1 S. O C, _4 j$ B8 Q6 rPart2 纯化步骤：
! o2 P, G( @* @& C ?/ a: u% j0 a4 A7 ^一、菌种准备：
5 K+ y8 u) d" j+ }/ r; f二、蛋白表达：' r8 y; x/ J1 P
三、蛋白纯化：6 J4 a) o7 R. Q( A
四、蛋白检验：
- x* v% j! ^9 w0 k7 M! ^Reference:
5 S& p/ Z& c- V: b& G, b# LTenneille E Ludwig, et al. Feeder-independent culture of human embryonic stem cells. Nature Methods 3, 637 - 646 (2006). P$ v: O6 u `. W, G4 K0 z+ W
网址http://www.nature.com/nmeth/journal/v3/n8/abs/nmeth9
bFGF protocol文献.pdf
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bFGF蛋白提纯Protocol.doc
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发表于 2010-1-12 18:11
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