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楼主: 待鹤
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细胞状态一直不好,大家看下细胞表面和细胞之间的小黑点儿是不是支原体污染   [复制链接]

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美女研究员

34楼
发表于 2010-1-26 15:50 |只看该作者
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我的细胞也有这样的现象,传代后会好一点
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33楼
发表于 2010-1-24 19:12 |只看该作者
认为不是细胞碎片,会繁殖,抗生素浓度加大后,会有所抑制,降低后会很快繁殖,但是无法消除掉。养SSC时也出现过,有人认为是污染。
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金话筒 优秀会员

32楼
发表于 2010-1-23 15:16 |只看该作者
回复 1# 待鹤 : H3 _" _& U0 K+ F, h- F
1 Z$ @5 e; n* `' E! J

+ O9 W# u; M7 J9 ]1 u4 p    支原体很小,看不到的。会不会是不贴璧的死细胞?
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31楼
发表于 2010-1-23 10:42 |只看该作者
我也认为是血清的问题,我们的细胞最近也是状态很不好。也有这些残渣似的东东。那么细胞碎片是怎么造成的呢?
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30楼
发表于 2010-1-21 14:49 |只看该作者
楼上说的很对,1一般细胞污染,培养液会变得浑浊,但是支原体的污染大多都是清亮的,它使得细胞生长变缓慢,形态也改变,还出现黑点,电镜下可以观察到。2细胞凋亡后的碎片也有可能出现黑点,但可能性不大。3同时血清质量的问题也有可能。4原代的培养要比传代后的慢。
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29楼
发表于 2010-1-21 14:18 |只看该作者
也有可能是凋亡的细胞碎片吧
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28楼
发表于 2010-1-21 11:08 |只看该作者
也遇到过这种情况,感觉是细胞自身代谢的原因,用PBS洗,勤换液,细胞就会慢慢好起来。
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27楼
发表于 2010-1-21 09:49 |只看该作者
在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动(类似布朗运动),这种小黑点既不是细菌、霉菌,也不是支原体(我们曾经请周守长用血平板培养过,没有菌落出现),目前业内人士称其为“黑胶虫”。5 `) X) r" s, }/ C+ A9 v2 @( q
    个人觉得是血清的问题,处理方法可以参照如下:9 s. O3 @" _- D" s
6 }: v3 {5 g  b( m9 w7 T
    首先,血清买回来灭活前冻融应逐级冻融,即按照-20℃——4℃完全融化后,再置入水浴中,与室温一起升高到56度,这样的目的是避免温度骤变,导致血清中的营养物质丧失活性。
4 j1 R  X( _, H' P# Y7 |  第二,血清灭活后分装保存。按照每次用血清的量分装,尽量减少血清冻融的次数。分装时注意无菌。* _( K; l0 e* Y) E2 D
  第三,细胞培养时血清浓度稍大一些。通常细胞培养血清浓度为10%-15%,但如果血清冻融次数过多,那营养物质丧失活性,按15%的浓度配制事实上达不到15%的营养成分,故培养基配置时一般用18%-20%的血清。
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26楼
发表于 2010-1-20 23:06 |只看该作者
我们也有这个问题,是不是像小蝌蚪一样的,会原地转圈圈的,我们管这个叫黑胶虫,谁知道是什么,好像是血清的缘故,我们现在都用0.22filter过滤,不过出现以后,很难就去掉.这个东西,细胞密度高,可以抑制它的生长,,,勤换液,多用pbs洗吧,
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25楼
发表于 2010-1-20 20:34 |只看该作者
我的细胞传代次数多了也曾经出现过类似情况,形态有点乱,不是那么典型了。我重新做的
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