羟乙基淀粉分离脐血和FICIOLL分离脐血有何不同吗？

jiuxuya

如果分离的目的主要要留更多的单个核细胞，想要诱导更多的免疫细胞的话，这两种分离液哪个比较合适呢？

alex19901

羟乙基淀粉的作用就是沉降红细胞，一般分离诱导免疫细胞用ficoll

jiuxuya

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1 l! v# X9 a) @& W# v9 K* S4 H
- r) |  V( [/ m4 }5 [那么问题来了，既然羟乙基淀粉就是沉降红细胞那么说明它也可以分离诱导免疫细胞啊

fenglinzhu

回复 jiuxuya 的帖子7 z: Q4 X; S* |9 g7 c9 J) V* J
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诱导免疫细胞用FICOLL会好一点，诱导免疫细胞需要的是单个核细胞，而恰恰FICOLL分离获得的就是单个核细胞。虽然羟乙基淀粉分离得到的有核细胞中也包含单个核细胞，但更多的是其他细胞，会影响后续的诱导。

jiuxuya

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- x" f* }  g: h4 E% N) Y* t5 ^3 y5 I7 m' i) ^8 n- Z  A
刚看到，是的，那既然这样的话，先用HES分离到有核细胞再用FICOLL是不是就可以分理出当个核细胞呢？

alex19901

你做实验用的外周血量大吗？如果不是很多直接用ficoll得到单个核细胞就好了，纯度还很高，不需要先沉降再ficoll，这样反而耽误时间。

jiuxuya

回复 alex19901 的帖子* y% ?/ R" h0 \4 l" _
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请问如果分离单个核用HES的话，导致细胞纯度不纯的话，但是单个核肯定数量多这种情况下，到底哪种效果好呢?

fenglinzhu

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) y1 o. J+ j4 V1 F
& }& D5 P+ A: S* n- K1 S  X你得知道你想做的是什么，如果只是为了去红，那用HES就够了，如果你想获得单个核细胞，那就用FICOLL。如果外周血量非常大，那用HSE去红后再用FICOLL可以减少FICOLL的使用量，提高FICOLL的工作效率。如果外周血量不多，那直接用FICOLL分离就好了，可以减少处理过程中细胞的损失，毕竟多一步操作就多一点损失。
" g  m( X1 W5 x7 z4 s1 R细胞数多和细胞纯度高从某种意义上讲是冲突的，所以明确实验目的很重要，能够更好的达到实验结果，才是最佳的效果。, m2 Y1 h3 }3 S0 e; ]9 G" Q
还有单个核和有核细胞不是一个概念，有核细胞多不代表单个核细胞多。

jiuxuya

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, R: H; E0 f  S: b4 N4 _
谢谢回复，其实是这样的，我们有2个需求，1个是为了储存单个核细胞，所以需要单个核细胞数量分离的时候尽可能多，然后另一个就是我们要从单个核细胞里诱导免疫细胞，所以还是需要单个核细胞数量尽可能的多，所以您可以推荐一个分离方案吗？单纯的用FICOLL是不是效果不好呢？有什么分离方法可以尽可能的提高分离出单个核细胞的数量呢？

fenglinzhu

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; z* X. m4 W. n) J3 e" l
) v! B. J! z* w你的目的是单个核细胞，那当然是直接用FICOLL分离比较好。HES+FICOLL在HES处理的时候难免有一些细胞损失掉。
. C9 \# C% |8 O  U' m# f, z( ]* H. g冻存的话你可以做个对比实验：- f' u3 R. l7 X1 q2 {- _! t% a
1、同样的样本分成两等分，第一份直接用FICOLL处理后冻存，第二份用HES处理后直接冻存；: T0 H8 i8 H+ F, Y. y
2、冻存环境相同的情况下冻存1-2星期；
* [; s. g% c8 G- P8 ^" m( b3、复苏FICOLL计细胞量和活率，复苏HES处理后直接冻存的细胞，用FICOLL处理后计细胞量和活率；
6 v) Y, p6 ?. ~6 ^. X4、做免疫细胞诱导实验，比较两者差异。) u1 p( y& d9 D% Z& @
我也不知道结果怎样，实验结果是最有说服力的，如果能做这个对比的话，能不能把实验结果分享一下，谢谢