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发表于 2010-3-12 08:57 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

从事细胞培养的各位，每天都会和培养基打交道。培养基对细胞生长至关重要，我们一定不能忽视这个问题，干细胞一般对生存环境要求较高，大家更得用心伺候。+ Y6 o# R. A/ d' s
本人花点时间，下决心整理一下网络资源，和大家分享！
- j) {- \) X9 P5 {
天然细胞培养基3 P& W7 f% U3 P+ r7 g3 f
　　天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。
血清种类
　　目前用于组织培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。选择用牛血清培养细胞的原因：来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。 : B  d' {5 ^) n# @
　　牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 8 C/ S6 Y0 f$ _& h
血清的主要成分7 t. O  \: `0 W2 y1 d8 }
　　血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
血清主要作用
1. 提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。4 }) Z9 \: Z# e) ~/ m9 r
2. 提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
3. 提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
4. 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。 - X: ~2 b9 N/ t9 |1 j
5. 对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。
血清培养基主要问题
  ! R6 x7 Z, ~5 h
1. 血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难。   W  |6 |% I! T$ ]2 s& |& S6 d
2. 血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制。
3. 对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长（成纤维细胞）同时抑制另一类细胞生长（表皮细胞）。
4. 血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。
5. 动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。
6. 取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性。
7. 大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。
血清的质量标准9 ~+ k# y* a8 c9 l7 p
　　血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求：  P% I) @6 ], H. a9 K/ B, r
1. 牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。% Y: w7 V7 ~0 j
2. 有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。  P) J0 v% r" i1 e' a4 J; U
3. 证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。 : C6 T. O8 d5 @( I9 ~6 C0 S
4. 血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。
5. 无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。 7 {! ~+ c$ z6 y& p, M% m
6. 对细胞有良好的支持繁殖作用。 ' j, l( e$ C) V9 \* Q
　　我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中提出比较严格的标准要求。包括蛋白质含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。6 E  L# j) G3 \; M
血清质量的鉴定
  6 b# E1 b) x; k8 o' h/ ?
1. 理化性质：如渗透压、pH值、蛋白电泳图谱、蛋白含量、激素水平、内毒素等。蛋白含量包括血清总蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（应小于20g/L)、血红蛋白含量等。其中球蛋白含量是一项非常重要的指标，血清中球蛋白主要是抗体，球蛋白含量越低血清质量越高。血红蛋白也是越低越好。 3 m7 T+ M5 q+ Q
2. 微生物检测：包括细菌、真菌、支原体、病毒等。特别是对支原体、病毒的检测，支原体是一种很小的微生物，可通过孔径22u的滤膜。支原体、病毒污染在光学显微镜下难于察觉，细胞也能生长繁殖，但会影响实验结果。检测支原体的方法很多，如培养法、PCR法、荧光染色法、电镜观察法等。
3. 促生长效果：这是血清重要的特性之一，应当以培养的细胞来检测。有两种方法：克隆形成率、贴瓶率测定法和连续传代培养法。 - ]7 Z' u  C! h( x2 X# S; {! ^
（1）克隆形成率测定:一般以悬浮生长的细胞为培养对象，按有限稀释法做克隆化培养，将不同批号的血清配制成不同浓度的培养基，细胞也稀释成不同浓度，接种到96孔板，每孔200ul，培养一定时间，统计有克隆生长的孔，计算出百分比，再与对照的标准血清相比较，就可看出不同批号血清间的区别。比较低的浓度，更能观察出血清质量间的细微差别。 , G/ b- O+ J6 ~. i. q5 Z3 E
+ s( N/ V* Q9 k
（2）贴瓶率测定:是以贴壁细胞为培养对象，将细胞稀释至低密度，接种至平皿，每皿200或100个细胞，以不同浓度的血清培养基培养，培养一定时间后弃培养基，染色后统计集落数，计算出集落数占接种细胞数的百分比，同样再与标准血清比较，判断血清质量高低。
（3）连续传代培养法:是将细胞培养于3个一定体积的培养瓶中，待测血清配制为5％浓度，一般于第七天收集细胞，计数，取平均值，中间可以更换一次培养基。连续测试三个周期以上，观察细胞生长状况，并将每次的计数结果与标准血清的测试结果比较。2 B6 T9 m( \; O% u- W0 ]
4. 对于使用者，判断血清质量先从外观入手。好的血清应该是透明清亮，土黄色或棕黄色，无沉淀或极少沉淀，比较粘稠。如发现血清浑浊、不透明、含许多沉淀物，说明血清污染或血清中的蛋白质变性；若血清呈棕红色，说明血清中的血红蛋白含量太高，取材时有溶血现象；如果摇晃时感觉液体稀薄，说明血清中掺入的生理盐水太多。如果要进一步了解血清的质量，则应连续培养某些细胞，观察细胞生长状况。 - c0 @4 p/ R) U5 W9 p" i8 w

血清的使用与储存1 f: r. F* |% }. T: ?
　　正确的使用及保存血清，才能使血清发挥应有的作用。
1. 使用前处理：大部分血清在使用前必须灭活处理，即56℃30分钟。灭活的目的是去除血清中的补体成分，避免补体对细胞产生毒性作用。血清经过灭活也会损失一些对细胞有利的成分，如生长因子，因此也有人提出血清不经灭活直接用于培养，这样做的前提是确认血清中不含补体成分。对于一些品质高的胎牛血清和新牛血清可以考虑不经灭活直接用于细胞培养。 ( X4 ^# n. t: I  B  F6 z! E
2. 储存条件：血清一般储存于－20℃，同时应避免反复冻融。购买大包装的血清后，首先要灭活处理，然后分装成小包装，储存于－20℃，使用前融化。融化时最好现置于4℃。融化后的血清在4℃不宜长时间存放，应尽快使用。% y% `( v+ y6 Z4 @# b
3. 使用浓度：自从有了合成培养基，血清就是作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为5－20％，最常用是10％。过多血清容易使培养中的细胞发生变化，特别是一些二倍体的无限细胞系，迅速生长之后容易发生恶性转化。 / m' e" e; Q5 F! d
   采购血清时，最好先从供应商处索取样品进行试验，选定一批后就要保留足够使用6个月至1年的量，直至用另一批经过预先试验的样品代替。6 D2 p) w. f6 ^" u; d
6 m4 g: K0 \1 U0 ~/ [3 D& ?
合成细胞培养基3 }0 x5 {/ F" \% Q3 n: r, v

合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。它有一定的配方，是一种理想的培养基。目前合成培养基多达10多余种，有的培养基仍在不断进行改良。早期组织培养是利用天然培养基，目前合成培养基已经成为一种标准化的商品，从最初的基本培养基发展到无血清培养基、无蛋白培养基，并且还在不断发展。合成培养基的出现极大的促进了组织培养技术的普及发展。

基本组分6 e6 l* E% T& f9 `2 q# `5 t- d

1. 无机盐：CaCl2 KCl MgSO4 NaCl NaHCO3 NaH2PO4。对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。+ \3 U; @/ E, `) S$ r" k$ |
2. 氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)。它们都是细胞用以合成蛋白质的必需原料，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 4 c- q) f+ p! T: i
3. 维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。脂溶性维生素(A、D、E、K)常从血清中得到补充。水溶性维生素包括牛物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素和B12。维生素C也是不可缺少的，对具有合成胶原能力的细胞更为重要。 + h; o8 z- I0 J- T! l2 e
4. 碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖和丙酮酸钠等。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
5. 葡萄糖和谷胺酰胺的合理使用：乳酸是葡萄糖不完全氧化的产物。体外培养条件下95％的葡萄糖转变为乳酸，这降低了营养物质的代谢效率，降低培养基pH值，增加渗透压。在氧气供给不足的情况下，NADH转运系统苹果酸－天冬氨酸穿梭系统活性低而不能将糖酵解产生的NADH氧化磷酸化为NAD+，细胞只得以降低能量需求的方式如激活乳酸脱氢酶将糖酵解产生的丙酮酸与NADH反应生产乳酸和NAD+，从而保证了糖酵解的顺利进行。另一个可能的解释是连接糖酵解与TCA循环的特异性酶如丙酮酸脱氢酶复合物、磷酸丙酮酸羧化酶激酶和丙酮酸羧化酶活性低下，直接导致糖酵解与TCA循环的失衡。因此体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造成细胞营养供应不足，细胞生长抑制。该方法需要对葡萄糖的消耗与需求、乳酸的生产速率以及目的蛋白的表达量等参数进行综合考虑方可应用。 ' o3 q" x+ v! E/ y
　　在目前常用的培养基中，葡萄糖和谷胺酰胺是体外培养动物细胞的主要能源，其能量代谢通路与体内完全不同，表现为葡萄糖主要经糖酵解途径为细胞提供能量，谷胺酰胺大部分通过不完全氧化途径，另一小部分通过完全氧化为细胞供能。因此，适当的调整细胞内的代谢途径，使之能促进细胞的快速生长和产物合成，同时减少代谢抑制物的生成是行之有效的一种策略。 : N$ T" m$ \2 d6 {8 |
　　许多动物细胞如CHO、BHK和杂交瘤细胞对营养物质葡萄糖和谷氨酰胺的消耗利用很快。然而对于细胞生长而言，二者的快速利用并非细胞必需；相反相当一部分转化为代谢废物乳酸和氨，以及一些非必需氨基酸如丙氨酸，脯氨酸。其中，乳酸和氨是两种主要代谢废物，其积累可影响细胞生长以及产品质量。减少这两种代谢产物的积累，是大规模细胞培养技术研究的重要方向。% p3 [* b8 \( c: ^. ]. }( g1 ]
　　氨是由谷氨酰胺和天冬酰胺产生的。限制培养基中谷氨酰胺的含量亦是减少氨生成的常用方法。 4 Y' i! J$ O% D6 n
6. 除了以上与细胞生长有关的物质以外，培养基中一般还要加入酚红（当溶液酸性时pH小于6.8呈黄色；当溶液碱性时pH大于8.4呈红色），一种pH指示剂。 . H8 P0 m" g. @2 A2 S+ n
7. 在较为复杂的培养液中还包括核酸降解物(如嘌呤和嘧啶两类)以及氧化还原剂(如谷胱甘肽)等。有的培养液还直接采用了三磷酸腺苷和辅酶A。# G0 L  J. `, v4 X; Z+ }! ^& |
常用试剂配制方法
氨试液7 D, K# i+ f( o7 U
取浓氨水200ml，置1000ml量杯中，加水稀释至500ml。
碱性酒石酸铜试液：配600ml。  1 d7 G- O4 J8 p* V8 N
（1）取硫酸铜结晶20.8g，置500ml量杯中，加水使溶解成300ml，转移至500ml试剂瓶中备用。（可长期保存）
（2）取酒石酸钾钠结晶103.8g与氢氧化钠30g，置500ml量杯中，加水使溶解成300ml，转移至500ml试剂瓶中备用。（需新鲜配制）  \0 f  K/ Q# ?2 q. F9 W
临用前将两液等量混合，即得。
0.2％酚酞指示液：配500ml。（可长期保存）+ y/ L5 O6 f( O  `8 x/ u! W/ h8 g
粗称酚酞1g，置500ml量杯中，加95％乙醇500ml，使溶解，即得。) L" N+ b/ b2 l
0.02mol/l氢氧化钠滴定液：配500ml。（可长期保存）4 E* u+ x, P- \2 V9 x8 R- M& v% q
取氢氧化钠0.4g，置500ml量杯中，加水使溶解成500ml。- p  u0 a3 p" N% r# N4 S
稀硝酸：配4000ml。（可长期保存）6 D4 s" g' _# @, r+ j
取硝酸（16mol/L）210ml，置3000ml烧杯中，加水稀释至2000ml。配2次。
标准氯化钠溶液（10ug/ml）：配1000ml。（可长期保存）) a3 T6 z( D, _% X% I0 C+ O: t- m8 e
精称氯化钠16.5mg，置100ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。（100μg/ml）, A8 n# u* h! p3 ]. I
临用前，精密量取储备液100.0mL，置1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
8．硝酸银试液：配500ml。（需新鲜配制）% c  Y, Q. J2 z9 n" R
取硝酸银8.75g，置500ml量杯中，加水溶解至500ml。  ' X- v5 R) k5 k. z
9．稀盐酸：配3000ml。（可长期保存）( i. K+ I0 R0 [" A
取盐酸（12.5mol/L）702ml，置5000ml烧杯中，加水稀释至3000ml。! h, u; M! ~7 W8 e# A1 ^: W* @- _
10．标准硫酸钾溶液（100ug SO4-2/ml）：配500ml。（可长期保存）
精称硫酸钾90.5mg，置100ml烧杯中，加水溶解后，转移至500ml量瓶中。7 U9 u( }6 s2 H, D8 z& i. y
11．25%氯化钡：配3000ml。（可长期保存，第二年如混浊，过滤）
粗称BaCl2750g，置5000ml烧杯中，加水超声溶解并稀释至3000ml（澄清）。8 i7 Z/ p4 b5 g: [$ s$ X! q9 P+ t
12．标准铅溶液（10ugPb/ml）：配600ml 。 ; \7 E& e) F" S
精称硝酸铅16mg，置50ml烧杯中，加硝酸0.5ml与水5ml溶解后，转移至100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。（100ugPb/ml）（放冰箱长期保存）- ^/ K/ P6 f2 U7 ]7 Q5 r
临用前，精密量取储备液10.0ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。; B  T) x2 b9 l% S9 Q
13．稀醋酸：配2000ml 。（可长期保存）
粗量冰醋酸（17.5mol/L）60ml，置1000ml量杯中，加水稀释至1000ml，调pH3.5。. S! f# c4 a" {- _4 p; {) I
14．醋酸盐缓冲液（PH3.5）：配2000ml。（包括阿司匹林的重金属检查，需新鲜配制）
粗称醋酸铵250g，置1000ml量杯中，加水250ml溶解后，加7mol/L 盐酸溶液380ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节PH值至3.5（电位法指示），用水稀释至1000ml，即得。
15．硫代乙酰胺试液：配1200ml。（需新鲜配制）
（1）粗称硫代乙酰胺8g，置500ml烧杯中，加水200ml超声溶解，转移至试剂瓶中（硫代乙酰胺液），置冰箱中保存。（需新鲜配制）% Z: e1 x& b* Y: h9 P1 i
（2）配制1mol/L NaOH  1000ml：粗称NaOH  40g，置1000ml量杯中，加水溶解至1000ml。取600ml NaOH，200ml水，800ml丙三醇在3000ml烧杯中混匀（混合液）。转移至试剂瓶中，置冰箱中保存。（可长期保存）
临用前取混合液1000ml，硫代乙酰胺液200ml，置80℃水浴上加热30秒，冷却，分装。
16．浓盐酸：直接装瓶。（可长期保存）% C  _1 l6 @) j2 }
17．碘化钾试液：配2000ml。（可长期保存）& i5 c3 [9 a3 {+ i7 }
粗称碘化钾330g，置3000ml烧杯中，加水2000ml溶解，即得。
酸性氯化亚锡：配300ml。（保存三个月）
粗称氯化亚锡120g，加盐酸300ml使溶解（乳白状），静置过夜，即得（微黄色，透明）
锌粉：用原瓶试剂。
醋酸铅棉花：（1）醋酸铅试液：粗称醋酸铅20g，加新煮沸放冷的蒸馏水超# U, d8 Q0 `0 m0 U% w0 U6 l
声溶解，再滴加醋酸使溶液澄清，再加水至200ml。（需新鲜配制）
（2）取脱脂棉，浸入醋酸铅试液－水（1：1）的混合液，浸湿后，挤压除去过多的溶液，并使疏松，在100℃以下干燥，置玻璃瓶中密封保存。（可长期保存）
注意：醋酸铅试液有毒，禁止用手，要用镊子夹取棉花。# d' K4 E9 j3 k6 l7 S5 k# a+ I
21．溴化汞试纸：（1）乙醇制溴化汞试液：粗称溴化汞5g，加乙醇100ml，微热使溶解，本品置具塞瓶中，暗处保存。（需新鲜配制）
（2）取国产定量滤纸（质地较疏松），剪成所需圆形，浸入乙醇制溴化汞试液中，1小时后取出，在暗处晾干，即得。（可长期保存）
注意：溴化汞试液有毒，禁止用手，要用镊子夹取滤纸条。, H8 L2 M' i* J9 G
标准砷溶液  配1000ml, D. ~) B3 ?) f( [5 D! x
称取三氧化二砷0.0132g，置100ml量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸（0.05mol/L）中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液（100 ug/ml）。（可长期保存）
临用前，精密量取储备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得（1 ug As3+/ml）。0 }2 x* g  ~1 h
22．三氯化铁试液：取三氯化铁45g，加水使溶解成500ml，即得。
23．碳酸钠试液：取一水合碳酸钠625g或无水碳酸钠525g，加水使溶解成5000ml，即得。
24．稀硫酸：取硫酸57ml，加水稀释至1000ml，即得。, X' j5 [& Q1 d" l5 s0 [
25．新制的稀硫酸铁铵溶液：$ X: L2 F; S6 Y" b' ?. H
硫酸铁铵指示液：称取硫酸铁铵8g,加水溶至100ml。
取盐酸9ml，加水至100ml。取10ml，加硫酸铁铵指示液20ml后，再加水适量使成1000ml。
26．中性乙醇：取适量乙醇，加入酚酞指示液3滴，用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定至淡红色。
27．比色用氯化钴液：取氯化钴20g，加盐酸10ml，加水溶解并稀释至1000ml，即得。9 e6 ~! c  Q/ }9 \
28．重铬酸钾液：称取重铬酸钾75g，加水至1000ml.
29．硫酸铜液：称取硫酸铜85g，加水至1000ml。
30．0.01％水杨酸溶液：精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，摇匀，再加水使成1000ml，摇匀。* g2 E8 \9 x( o- p+ J+ P, D
31．氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）：( }; F) i6 _* `- G! [
取氢氧化钠适量，加水摇匀使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。5 Y( c  z. k( H8 E1 h6 ~2 T
配制：取澄清的氢氧化钠饱和液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀。4 L8 E. r, Z7 U* f9 u- D
标定：取再105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50ml，振荡，使其尽量溶解，加酚酞指示剂2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1ml氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2 mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，计算本液的浓度，即得。% Q% u: i% n1 o3 y8 Z8 J
注：全部资源来自网络，本人稍加整理，对原文作者予以致谢，大家使用时仅供参考，本人不承担相关责任！！
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原作者neuron