3T3-L1前脂肪细胞分化问题

shirley0716

各位同学大家好，我是细胞学的新手，最近做前脂肪细胞分化的实验，但是每次都刚加诱导分化液，细胞就卷成一团，或者全缩在一起浮起来，有没有人遇到过这种情况？应该是什么原因呢？希望大家能帮我解答，谢谢

decloud2009

你的细胞是自己分离的还是买的。。我们自己分离的细胞就贴得很牢固阿。。。
9 B; f8 y- y2 f. Y+ d" {: g
2 @, ?/ @9 a, x9 |从来没有发生这样的。。。

shirley0716

谢谢楼上的回复，我们是买的，并且别实验室也出现这种情况过

饶冠华

没有养过这个细胞，发表一下个人看法：我觉得主要是贴壁不牢固引起的。贴壁不牢固的细胞在外界环境突然变化的情况下 就有可能漂浮起来并成团。! q4 c( X2 U( F- {" d
建议：1. 用poly-L 铺板。
' i  O; m- c3 L/ K  |" \' m2. 预热培养基。8 X1 o& m" ?1 I* @& P, _
3. 检测分化液的PH值，尽量换液前后培养液PH值保持一致

冰罗布

我是一个新手，向版主请教一个问题，poly-L是多聚赖氨酸吗？用它铺板除了可以使贴壁更牢固之外，还有其他的作用吗？谢谢。

ambassador

我是一个新手，向版主请教一个问题，poly-L是多聚赖氨酸吗？用它铺板除了可以使贴壁更牢固之外，还有其他的 ...: ?4 y, i! ~8 _2 n( z- ^( X
冰罗布 发表于 2010-3-21 22:47

/ i; E# u1 d! ?6 A$ u, a# ]9 ^' x0 T/ T# H7 N) b4 N" n, p
    分子量大于70,000的多聚赖氨酸可以用于促进细胞贴壁生长。
3 d) I$ C- v* A, x    Poly-L-lysine和Poly-D-lysine都可以用于促进细胞的贴壁生长。Poly-L-lysine可以被某些细胞所消化并吸收，摄入过多的Poly-L-lysine会产生一定的细胞毒性。如果遇到Poly-L-lysine有细胞毒性的情况，可以考虑选购Poly-D-lysine。

冰罗布

回复 6# ambassador
  A5 Z' z% P  B- {, V* h- n2 ]7 T- J8 I' j+ j, ^" N6 C

- f: x, G/ A# M    多谢！

shirley0716

我们每次都预热培养基，并且检验过分化诱导液和培养液的pH，都没有问题，版主提到的Poly-L，我想可以试试，但是我们的培养皿是coring的贴壁培养皿，底面已经涂有特殊物质，还需要再使用Poly-L吗？谢谢以上所有同学们的回复！

franklinhg

诱导等化业液是商业化的还是自己配置的？ 商业化的试剂盒的话  一般不会有什么问题。如果怀疑是试剂盒的问题  可以拿另外的干细胞或者肿瘤细胞做细胞对照  看对照的细胞是否也发生你上面的情况。如果没有出现的话  那估计是你的细胞株的问题，可以考虑换新的细胞株哈   弱国是自己配置的  那么你诱导剂一般是DEX，insulin,Indomycin,IBMX四者的混合诱导，但是Indomycin和IBMX是用有机溶剂配置的，一个是甲醇，另一个是DMSO，这个两者的浓度过高，对细胞的毒性很大，细胞有可能就漂浮了，相当于直接破环细胞膜了。个人的经验：DMSO的终浓度一般不要超过千分之一，甲醇也是。一般不会出问题。 希望对你有用。

franklinhg

至于其他同学说的板子粘附性的问题  我觉得可能性很小  " r+ D, \8 I2 `/ S+ R5 J( J
我做诱导用的板子 还是重复利用了很多次的板子   一样可以在用。泡碱液过夜后 双蒸水冲洗干净 然后开盖 紫外线照射过夜 第二天收集起来 用无菌的封口胶布包好 后面照用 简单实用