状态很差的SD大鼠MSC成功转染，有无什么办法补救的！

yzc820215

我养的一批SD大鼠MSC，成功进行了慢病毒转染，但是细胞的状态很差，请问各位大侠有无补救的方法！

xuhaoxiao

可能细胞密一点会好一些; W, K, W) x$ B" F! x
我转导小鼠MSC，密度有点低，结果几天不见长。. V) @6 J& P' h/ D3 P, T" Y9 l) y
后来密度高了一些，效果好多了。

开心果王

恩，我也同一楼的说法，建议楼主下次将细胞密度提高一些在感染一次试试！可能是与细胞旁分泌机制有关，可以加一些bFGF试试，应该会有改善！

have-a-rest

刚转染的细胞状态一般不会很好。$ B- f7 t' [0 F1 r3 c1 K3 _
建议这种密度不需要太勤换液，2天一次足矣。也不要老去观察，拍照，给细胞一个安静的生长环境，他们会缓过气来的！！5 _6 i7 M  P- O6 k' E: E# Q/ ]
祝顺利！

aphple85

回复 4# have-a-rest * p7 g! y: U: V

. ?8 ~' k9 m+ I4 u3 U
! ]1 e  h2 b6 i/ e$ \   你好，请问一下，你有没有做过用逆转录病毒感染悬浮细胞，能不能介绍一下具体操作，感染贴壁细胞的也行，谢谢！

xuhaoxiao

; D0 ]# c& J) q7 H# R  A6 D$ e  }) h# J4 M& g  A9 e: s
回复 5# aphple85 ) [  Z1 e- |$ w6 A# H3 l
我帮同学转导过THP-1, 就是直接向细胞悬液里面加入病毒，可以加一点polybrene，放回培养箱，24小时换液。  T6 F& B& ?! Z3 k
大概加50ul未浓缩过的病毒上清就可以到90%以上感染率。
4 C. h  U( ^* o祝好运！
' F$ T, z- y8 X2 Q4 k, @
9 q0 U  ?, M- }# t另外，转导后老是长的速度明显低于为转导细胞，建议直接扔掉，重新感染。

have-a-rest

回复 5# aphple85 , `% R$ B8 ]4 ?5 t+ ]! M) ?1 k
" o# n4 O" i  c! G2 X4 O
) a" i4 d$ M  s3 P& m
    用病毒感染细胞，其实我做的不多。8 F4 w% ]1 B4 A& s2 X
我觉得主要是得到合适滴度的病毒，根据细胞类型算算每个细胞能有多少个病毒去感染。感染的方法可以先悬浮，几个小时以后贴壁培养就是了。再后面就是筛选或分选纯化了。病毒感染过的细胞开始状态会不好，调养一段时间会好起来的。不过有些细胞感染效果很差，我最近也正在为感染ES而为难呐！

aphple85

回复 6# xuhaoxiao
, \5 ~# P' B' p. e$ a& `. E$ M2 Y, y2 d9 i% b7 u, b7 ^( U# Z
  谢谢啦，我转过K562细胞（悬浮细胞），也是加polybrene,不知道是操作的问题还是其他的,效果不好，我再试试，呵呵

aphple85

回复 7# have-a-rest 2 }0 H- t) t8 V% F: s
  x1 Y/ h2 q: t. |8 y: t. |
0 V2 \6 |1 |6 i  z- `
    多谢啦，呵呵

hansey

回复 6# xuhaoxiao $ s, }* ]1 M! |' ^4 I8 E6 ]
0 Q# Y2 `& n& l% ^7 Y
请问你们用的包装逆转录病毒的包装细胞跟体系是什么？谢谢！！