（转贴）SD大鼠脂肪间充质干细胞培养方法

大嘴青蛙

因为之前自己养SD大鼠脂肪间充质干细胞时，做了两三次都是效果不好，走了些弯路，后来终于找到有做的师兄，所以请教后，最终也养出来了，而且还不错，所以将自己的方法写在这儿，希望对一些也是养这个细胞的同学有些帮助。+ }# Z1 q* r2 D( X* B/ }5 n

4 K+ ~; u( g! v5 ]! c7 \' ^SD大鼠100g左右，断颈处死后置于75％酒精浸泡5分钟。3 O* B3 p9 y, z. o8 k
眼科剪剪开腹部皮肤后，分离腹股沟脂肪组织置于D-Hank's液中，将一些肉眼可见的结缔组织等去掉，将脂肪组织置于无液体的培养皿中，用眼科剪剪5－8分钟（尽量剪得碎些，像浆糊状样），然后加入0.1%的I型胶酶（量约为脂肪组织体积的2倍），转移至15ml离心管中，水平置于37摄氏度摇床中消化60分钟。消化完后加入含FBS培养基中和，1000r/min离心10mins，将浮在液体上面的脂肪组织和液体倒掉，加入含FBS的培养基重悬细胞（如果离心后看见离心管底部细胞沉淀中有块状的结缔组织，可以重悬细胞，吹散细胞后用虑网过滤）。最后置于培养皿中培养，24h后首次换液体。' \" z% A& c$ E% F& W; ?
整个过程要注意无菌操作，特别是大鼠的浸泡以及取材时。

luwei8157

胶原酶浓度，用国际单位比较合适，因为每一批胶原酶的有效单位都不一样。( v" Y' {; v# C! _
一般配成625U/ml，用于脂肪消化，体积1：2或3，都可以。时间也是40-90分钟不等，主要是自己观察颜色的变化。

建文

学习了

兔儿乖

好呀，谢谢

bing119

学习中

franty

请教一下楼主：为什么选择100g左右的SD大鼠呢？有什么依据没？有的文献报道用的是出生4天的，我想知道是为啥，上网查也没有查到。

细胞海洋

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