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[讨论] 细胞的转染与细胞倍增时间的关系 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-4-7 19:37 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
培养细胞往往要转染相应的基因之后才做后续的检测,而转染又分稳定转染和瞬时转染。首先我想请教大家瞬时转染的转染效率大于多少时,才能代表具有新特性的细胞而继续后续工作呢?其次,转染时细胞的混合度有什么要求?不同细胞的有不同的倍增时间,这与转染时要求的混合度有联系吗?个人觉的比如瞬时转染,那么转进去的基因多以游离的状态存在,若倍增时间短的话,随着细胞的繁殖,携带目的基因的细胞比例减少,势必会对后续检测产生不利影响。
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金话筒 优秀会员 美女研究员 新闻小组成员

沙发
发表于 2010-4-7 21:54 |只看该作者
回复 1# ligangcw 4 K+ @1 U' W! Z! n# W
8 ~& m8 k4 \  i+ u( p
转然时细胞的会合度一般都要求在75%-80%,但不同的人看细胞密度估计的不一样,所以这也不是绝对的,金标准就是你转完第二天早晨换液的时候细胞基本满了,倍增时间与转染时混合度是有关系的了,长得快的相对要低密度时转染,因为虽说转染完细胞会长的慢,但也是相对的啊。转染效率当然要越高越好了,效率低肯定影响后续试验的
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藤椅
发表于 2010-4-16 13:16 |只看该作者
请问楼上,转染效率当然要越高越好那么最低限度应该是多少呢?还有若倍增时间短的细胞,混合度小一些,那么转染效率势必降低!
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板凳
发表于 2010-4-16 13:43 |只看该作者
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我们这里做转染一般要在百分之三十以上才能用于做后续试验。瞬时转染跟稳定转染所用的载体不同,转染方法也有些差别的。跟你所用的细胞也有关系,还是自己试试看吧
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优秀会员 金话筒

报纸
发表于 2010-4-16 14:51 |只看该作者
转染要看是什么细胞,和什么转染方法。以293T为例,如果是lip2000或者fugen6话,一般转染是要求是70%-90%的细胞密度。如果是磷酸钙转染的话,密度要求是50%-60%,如果是包装慢病毒密度要求70%左右吧,因为慢病毒产生的时候细胞生长状态大大下降,甚至会飘很多,密度大一点会好很多。转染时间一般是12-24小时之间,此时的细胞生长最旺盛,转染效率也最高。
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热心会员 博览群书 积极份子 优秀会员

地板
发表于 2010-4-16 14:58 |只看该作者
细胞倍增时间越短的,即增值分裂越快的细胞,转染的效率越高,因此必须使细胞处于最好的生长状态,转染效果才好。
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发表于 2010-4-22 16:15 |只看该作者
我转染的时候细胞密度大约30-50%最好,这时细胞数量不会太少,而且不会太密集影响病毒转染。这个与病毒种类,病毒滴度和转染效率都有关系。
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发表于 2010-4-22 16:33 |只看该作者
zhishenshen 瞬时转染跟稳定转染所用的载体不同,转染方法也有些差别的' S, F' p& K& ^

2 a* X/ k. h$ j9 ?" V5 a可否指点一二?问转与瞬转载体有何要求?转染方法又有何区别?期待ing····

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发表于 2010-4-22 16:37 |只看该作者
还有瞬转的细胞随细胞的增殖其转进去的基因是否会丢失?这样的话,倍增时间短的细胞,稍低的混合度转染后,阳性lv是否降低的更多?
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