细胞的转染与细胞倍增时间的关系

ligangcw

培养细胞往往要转染相应的基因之后才做后续的检测，而转染又分稳定转染和瞬时转染。首先我想请教大家瞬时转染的转染效率大于多少时，才能代表具有新特性的细胞而继续后续工作呢？其次，转染时细胞的混合度有什么要求？不同细胞的有不同的倍增时间，这与转染时要求的混合度有联系吗？个人觉的比如瞬时转染，那么转进去的基因多以游离的状态存在，若倍增时间短的话，随着细胞的繁殖，携带目的基因的细胞比例减少，势必会对后续检测产生不利影响。

不倒翁

回复 1# ligangcw
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转然时细胞的会合度一般都要求在75%-80%，但不同的人看细胞密度估计的不一样，所以这也不是绝对的，金标准就是你转完第二天早晨换液的时候细胞基本满了，倍增时间与转染时混合度是有关系的了，长得快的相对要低密度时转染，因为虽说转染完细胞会长的慢，但也是相对的啊。转染效率当然要越高越好了，效率低肯定影响后续试验的

ligangcw

请问楼上，转染效率当然要越高越好那么最低限度应该是多少呢？还有若倍增时间短的细胞，混合度小一些，那么转染效率势必降低！

zhishenshen

我们这里做转染一般要在百分之三十以上才能用于做后续试验。瞬时转染跟稳定转染所用的载体不同，转染方法也有些差别的。跟你所用的细胞也有关系，还是自己试试看吧

王乾

转染要看是什么细胞，和什么转染方法。以293T为例，如果是lip2000或者fugen6话，一般转染是要求是70%-90%的细胞密度。如果是磷酸钙转染的话，密度要求是50%-60%，如果是包装慢病毒密度要求70%左右吧，因为慢病毒产生的时候细胞生长状态大大下降，甚至会飘很多，密度大一点会好很多。转染时间一般是12-24小时之间，此时的细胞生长最旺盛，转染效率也最高。

wgydys

细胞倍增时间越短的，即增值分裂越快的细胞，转染的效率越高，因此必须使细胞处于最好的生长状态，转染效果才好。

icesnow

我转染的时候细胞密度大约30-50%最好，这时细胞数量不会太少，而且不会太密集影响病毒转染。这个与病毒种类，病毒滴度和转染效率都有关系。

ligangcw

zhishenshen 瞬时转染跟稳定转染所用的载体不同，转染方法也有些差别的
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4 L; m- K# C, \; n. b# G; a8 l" ?+ S可否指点一二？问转与瞬转载体有何要求？转染方法又有何区别？期待ing····

ligangcw

还有瞬转的细胞随细胞的增殖其转进去的基因是否会丢失？这样的话，倍增时间短的细胞，稍低的混合度转染后，阳性lv是否降低的更多？