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ellapan

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楼主

发表于 2010-4-19 18:30 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由细胞海洋于 2010-4-19 19:35 编辑

我培养的干细胞在传代后突然发生自发的分化了，我复苏R1/24代并培养数天状态都很好，可是在传代至25代时状态就不好了，并且好像开始有细胞分化，然后我就传代了一批到2代，可是今天观察26代的ES细胞绝大部分发生分化，分析其原因个人觉得 B8 Q( K% R, b; ], U
1.传代时体外操作时间过长。
2.血清灭活不好，因为ES细胞开始分化的时候恰恰我是刚刚启用新的一批灭活的血清（型号相同）。
图片是分化后细胞，我也是挺纳闷的，希望各位大侠指导一二！！

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周会

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沙发

发表于 2010-4-19 19:45 |只看该作者

貌似你的滋养层有点老化了，你用的第几代的啊

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ellapan

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藤椅

发表于 2010-4-19 21:37 |只看该作者

回复 2# 周会 6 R/ G2 O/ S1 }- P
应该不会是feeder的问题吧我用的是3代呀

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ppcl2

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板凳

发表于 2010-4-20 08:35 |只看该作者

你的feeder看来状态不是很好，这个不在乎是否你用的P3，少数情况，P0的MEF状态本身就不好，最好弃之，MMC处理前也要观察MEFs的状态，长得不好就不要用来当feeder了。1 u4 n8 v0 T |& ^6 x
再一个，R1 ES长到p26分化也不奇怪，理论虽说ES是可以无限传代保持为分化状态，但实际是不可能的，R1 ES算非常好的ES株，但普通ES培养状况下一般也就能保持良好生长状态到拍p25到p30，在p25甚至更早最好挑选好的clone重新克隆化一下，这样还能再用10多代，要不然较高传代ES培养基中需添加3i等分化抑制因子才行。